桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng)表達(dá)豬流行性腹瀉病毒S1蛋白及其免疫原性的研究.pdf

1、豬流行性腹瀉(Porcine epidemic diarrhea,PED)是全球流行的極具威脅性的豬病之一，由具有高致死率的豬流行性腹瀉病毒(Porcineepidemic diarrhea virus,PEDV)引起。該病在世界各地的爆發(fā)給全球養(yǎng)豬業(yè)造成了重大損失，但迄今為止尚無有效安全的疫苗可用。通過新手段研制PEDV疫苗十分必要。
　　S蛋白是PEDV的主要結(jié)構(gòu)抗原蛋白，由S1區(qū)和S2區(qū)組成，其中S1含有3個(gè)中和表位區(qū)域，常

2、作為PEDV基因工程疫苗研究中最重要的一個(gè)靶蛋白。本研究擬構(gòu)建S1基因的系列重組桿狀病毒：rvAc-S1、rvAc-SP-S1、rvAc-SP-S1-TMD、rvAc-SP-S1-eGFP、rvAc-SP-S1-eGFP-TMD，以實(shí)現(xiàn)在昆蟲細(xì)胞中高效表達(dá) S1或者在重組桿狀病毒表面展示S1。并將上述S1蛋白及表面展示S1的重組病毒分別作為蛋白亞單位疫苗和病毒活載體疫苗使用，初步探索兩種疫苗在BALB/c小鼠模型上的免疫效果。
　

3、　直接熒光、間接免疫熒光、免疫印跡、免疫電鏡對(duì)S1的表達(dá)定位進(jìn)行分析。結(jié)果表明：rvAc-SP-S1-eGFP和rvAc-SP-S1-eGFP-TMD感染Sf9細(xì)胞后，S1在Sf9細(xì)胞中高效表達(dá)，且S1胞內(nèi)表達(dá)量前者大于后者；S1定位于感染細(xì)胞的細(xì)胞膜附近及rvAc-SP-S1-eGFP-TMD表面。制備S1重組蛋白免疫原及表面展示S1的重組病毒顆粒性免疫原皮下免疫小鼠。間接ELISA、微量細(xì)胞培養(yǎng)中和試驗(yàn)、脾淋巴細(xì)胞增殖試驗(yàn)對(duì)免疫原刺

4、激小鼠產(chǎn)生的體液免疫及細(xì)胞免疫應(yīng)答效果進(jìn)行檢測(cè)。結(jié)果表明：展示S1的重組桿狀病毒免疫血清中存在特異性抗體，抗體效價(jià)達(dá)1:5000，并具有一定中和PEDV能力，中和效價(jià)達(dá)1:26。在PEDV刺激原作用下，展示S1重組桿狀病毒免疫鼠的脾淋巴細(xì)胞與對(duì)照組相比增殖顯著(P>0.05)。而S1重組蛋白免疫原小鼠后未取得理想效果。上述可知，表面展示S1的rvAc-SP-S1-eGFP-TMD重組桿狀病毒直接免疫小鼠可誘導(dǎo)產(chǎn)生體液及細(xì)胞免疫反應(yīng)。