豬瘟病毒E0-E2基因重組雞痘病毒遺傳穩(wěn)定性和免疫劑量研究.pdf

1、豬瘟(Classicalswinefever,CSF)是由豬瘟病毒(CSFV)引起的豬和野豬的一種高度致死性、接觸性傳染病，是嚴重威脅全球養(yǎng)豬業(yè)的疫病之一。豬瘟疫苗的免疫接種是預(yù)防豬瘟的一種有效手段。本文對豬瘟候選疫苗CSFVE0-E2基因重組雞痘病毒活載體疫苗的毒種遺傳穩(wěn)定性和疫苗免疫劑量進行了研究，獲得了以下結(jié)果。 1.將重組雞痘病毒rFPV-E0-E2在雞胚成纖維細胞上連續(xù)傳了20代，取第5、10、15和20代重組病毒，分

2、別用藍斑試驗、PCR擴增和基因序列分析以及間接免疫熒光試驗研究了重組病毒的遺傳穩(wěn)定性。結(jié)果各代次的重組病毒產(chǎn)生的蝕斑均為藍色，從各代重組病毒DNA中均擴增出了E0和E2基因，基因序列分析發(fā)現(xiàn)僅第20代重組病毒插入基因發(fā)生2個點突變，即E0基因139A→G，E2基因413A→G。間接免疫熒光也能夠檢測到目的蛋白的表達。結(jié)果表明重組雞痘病毒rFPV-E0-E2在雞胚成纖維細胞上傳20代以內(nèi)具有良好的遺傳穩(wěn)定性，插入的CSFVE0-E2基因能

3、夠正確穩(wěn)定表達。 2.用CEF細胞擴增了3批重組雞痘病毒rFPV-E0-E2，并對其進行了純度、病毒含量、特異蛋白的表達的檢測和無菌檢驗。結(jié)果表明，3批重組病毒rFPV-E0-E2具有較高純度，無細菌和霉菌污染，其TCID50分別為10-7.5·/0.025mL、10-9/0.025mL和10-9/0.025mL，并且均能夠正常表達CSFVE0-E2基因，擬作為疫苗的原始毒種種子批使用。同時，實驗室生產(chǎn)并檢驗了1批豬瘟病毒E0-

4、E2基因重組雞痘病毒活載體疫苗毒，測得CSFVShimen株對50～60日齡的豬瘟易感豬的LD50為10-2.8/2mL，為進行豬瘟病毒E0-E2基因重組雞痘病毒免疫劑量試驗提供了材料和依據(jù)。 3.使用變量免疫定量攻毒方法進行了CSFV基因重組雞痘病毒的免疫劑量試驗。將23頭豬隨機分成6組，分別以不同程序免疫不同劑量的重組雞痘病毒。免疫后28d，每頭豬經(jīng)頸部肌肉注射100LD50的Shimen株CSFV，繼續(xù)觀察21d，評價疫苗