華南地區(qū)狗牙根遺傳多樣性的形態(tài)與ISSR研究.pdf

1、狗牙根屬(Cynodon Richard)植物為多年生草本植物,世界上分布極廣,具有豐富的遺傳變異,是暖季型草坪草中最重要的草種之一,同時(shí)又是優(yōu)質(zhì)牧草。我國南方地區(qū)擁有豐富的狗牙根資源,具有很高的開發(fā)利用潛力。
　　 本試驗(yàn)在全面調(diào)查我國南方地區(qū)狗牙根資源的基礎(chǔ)上,以收集到的118份華南地區(qū)的狗牙根為研究材料,從形態(tài)學(xué)和DNA分子水平上首次對(duì)該地區(qū)的狗牙根遺傳多樣性進(jìn)行研究,目的是為了探明種源材料的遺傳關(guān)系,為狗牙根野生種質(zhì)資源

2、的有效保護(hù)、開發(fā)利用和核心種質(zhì)的構(gòu)建提供理論和科學(xué)實(shí)踐數(shù)據(jù)。研究結(jié)果表明:
　　 對(duì)華南地區(qū)118份狗牙根材料的直立枝葉長、直立枝葉寬、直立枝株高、匍匐枝葉長、匍匐枝葉寬、節(jié)間直徑、節(jié)間長、花序長、穗枝數(shù)、小穗數(shù)、小穗顏色、花藥顏色、柱頭顏色、莖的顏色、葉色和葉毛16項(xiàng)形態(tài)性狀指標(biāo)進(jìn)行分析,發(fā)現(xiàn)變異最大的是莖的顏色,變異系數(shù)達(dá)67.38％;其次為柱頭顏色,變異系數(shù)達(dá)55.54％;直立枝株高、小穗顏色、花藥顏色和葉毛的變異系數(shù)都達(dá)

3、到40％以上;變異最小的是穗枝數(shù),變異系數(shù)為11.85％。
　　 對(duì)各項(xiàng)形態(tài)指標(biāo)進(jìn)行簡單相關(guān)分析發(fā)現(xiàn)呈極顯著正相關(guān)/負(fù)相關(guān)的形態(tài)指標(biāo)有39對(duì),呈顯著正相關(guān)/負(fù)相關(guān)的的指標(biāo)有17對(duì)。16項(xiàng)形態(tài)指標(biāo)聚類分析結(jié)果表明,在閾值為1.40時(shí)將華南地區(qū)118份狗牙根材料分成九類;在閾值為1.54時(shí)將材料分成五類。
　　 利用改良的CTAB法成功的提取了狗牙根基因組DNA,通過瓊脂糖和紫外分光光度計(jì)檢測(cè)表明適合ISSR標(biāo)記的擴(kuò)增,能獲

4、得穩(wěn)定、清晰、重復(fù)性好,多態(tài)性高的條帶。
　　 利用正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)對(duì)模板DNA含量、引物含量2個(gè)因素4個(gè)水平進(jìn)行了優(yōu)化分析,建立了適合華南地區(qū)狗牙根ISSR擴(kuò)增的反應(yīng)體系:反應(yīng)總體積為15μL,其中包括模板DNA60 ng,ISSR引物10μmol/L,2×Easy Taq PCR Super Mix(含染料)7.5μL,ddH2O3.5μL。
　　 利用優(yōu)化的ISSR-PCR反應(yīng)體系和篩選的14條ISSR引物對(duì)118份狗