抗棗瘋病相關(guān)基因的克隆與分析.pdf

1、棗（Ziziphus jujuba Mill.）為鼠李科（Rhamnaceae）棗屬（Ziziphus Mill.）植物，是我國(guó)特有的寶貴種質(zhì)資源和重要的特色果樹。棗瘋病由植原體（phytoplasma）引起，是棗樹上最嚴(yán)重的毀滅性病害之一。利用抗病種質(zhì)資源，借助分子生物學(xué)手段和方法克隆抗病基因，對(duì)開展分子育種具有重要意義。前期研究中本課題組已經(jīng)發(fā)現(xiàn)在駿棗品種中存在對(duì)棗瘋病的抗病和感病品系。本研究利用AFLP和SON-PCR 技術(shù)，以駿

2、棗抗病和感病品系為試材，進(jìn)行了基因組水平上的差異表達(dá)分析，并利用獲得的差異片段進(jìn)行了側(cè)翼序列的延伸。主要結(jié)果如下：
　　 1．通過駿棗抗病和感病品系的AFLP分析，獲得了11條差異片段。應(yīng)用56 對(duì)選擇性引物對(duì)對(duì)駿棗的棗瘋病抗性和感病品系進(jìn)行AFLP分析，最終利用篩選出的10 對(duì)特異性較好的引物進(jìn)行擴(kuò)增和差異片段的篩選，最終確定并分析了了11條差異片段，其中6條是與抗病相關(guān)的，5條是與感病相關(guān)的。
　　 2.建立了一套適

3、合于棗未知基因側(cè)翼序列擴(kuò)增的SON-PCR 技術(shù)體系。本試驗(yàn)應(yīng)用傳統(tǒng)的SON-PCR 技術(shù)體系不能獲得理想的試驗(yàn)結(jié)果，經(jīng)在原有體系基礎(chǔ)上進(jìn)行改進(jìn)和優(yōu)化，即將第二、三輪嵌套擴(kuò)增由原來的一步擴(kuò)增都分為兩步進(jìn)行。主要是將第二、三輪的嵌套擴(kuò)增中的線性延伸單獨(dú)列出，從而增加了反應(yīng)的特異性和高效性。試驗(yàn)證明改進(jìn)后的SON-PCR 體系能夠有效地得到目的差異條帶，獲得理想結(jié)果。
　　 3.利用本試驗(yàn)建立的改進(jìn)SON-PCR 技術(shù)將一條抗性相關(guān)

4、片段（165bp）延伸到了1119bp。利用改進(jìn)的SON-PCR 技術(shù)將抗性相關(guān)片段R1（165bp）上游延伸了390bp，下游延伸了564bp，拼接后長(zhǎng)度為1119bp。利用NCBI數(shù)據(jù)庫，進(jìn)行了Blast 比對(duì)分析，此序列與白楊中編碼SAUR 家族蛋白（SAUR3）的mRNA序列有80％的相似性；通過開放閱讀框的尋找，結(jié)果顯示此序列含有一個(gè)不完整的開放閱讀框，多個(gè)起始密碼子，不含終止密碼子，此部分開放閱讀框編碼161個(gè)氨基酸，其中在