病毒的感染與免疫

1、三個(gè)階段：１、機(jī)體水平的研究階段２、細(xì)胞水平的研究階段３、分子水平的研究階段,病毒免疫應(yīng)答的特點(diǎn)---宿主和病毒相互作用１、不同蛋白具有免疫原性２、病毒可增殖、變異和擴(kuò)散３、其數(shù)量、分布范圍、存在部位等方面可不斷變化４、可主動(dòng)感染免疫細(xì)胞和器官，改變或破壞免疫系統(tǒng),病毒的輔助結(jié)構(gòu)（某些病毒具有）,（1）囊膜：核衣殼外包繞的一層含脂質(zhì)的外膜，其中含有雙層脂質(zhì)、多糖和蛋白質(zhì)。（2）病毒蛋白酶：催化病毒核酸。（3）觸須樣

2、纖維：腺病毒唯一具有此結(jié)構(gòu)，該纖維可吸附到敏感細(xì)胞上，與致病作用有關(guān)。病毒的衣殼、囊膜中的蛋白質(zhì)和觸須樣纖維是病毒感染宿主細(xì)胞的重要結(jié)構(gòu)。也是重要的免疫源性物質(zhì),病毒感染過程,●侵入宿主——受體配體結(jié)合許多病毒通過與重要的正常細(xì)胞表面分子結(jié)合而進(jìn)入細(xì)胞：HIV-1：與人T細(xì)胞的CD4分子結(jié)合 ；EB病毒：與人B細(xì)胞表面的補(bǔ)體受體CD21結(jié)合；鼻病毒：與細(xì)胞間粘附分子(ICAM-I)結(jié)合。 病毒特異地感染某些織或這些組織

3、中特定細(xì)胞群體并在其中復(fù)制的能力稱作病毒的親嗜性（tropism）。,個(gè)體間傳播途徑：多種多樣,水平傳播（horizontal transmission）：病毒在人群個(gè)體之間的傳播。（1）經(jīng)皮膚傳播：（2）經(jīng)粘膜表面?zhèn)鞑ィ?呼吸道粘膜 消化道粘膜 眼粘膜 生殖道粘膜 垂直傳播（vertical transmission

4、）。；通過胎盤或產(chǎn)道，病毒直接由親代傳給子代的方式為垂直傳播。,●宿主自身內(nèi)的傳播,局部播散:在侵入部位附近造成組織損傷 血液播散:病毒在侵入部位復(fù)制后播散到局 部淋巴結(jié)，并經(jīng)淋巴管進(jìn)入血流， 形成病毒血癥(primary viremia）。 神經(jīng)播散:大多數(shù)經(jīng)神經(jīng)播散的病毒是通過 快速軸突轉(zhuǎn)運(yùn)過程（fast

5、 axonaltransport）播散的。,病毒感染的致病機(jī)理,1、 殺細(xì)胞效應(yīng)（cytocidal effect）:病毒的增殖造成細(xì)胞死亡。某些病毒結(jié)構(gòu)成分的直接毒性作用。 病毒早期蛋白抑制細(xì)胞高分子物質(zhì)的合成細(xì)胞溶酶體膜受損，釋放溶酶體酶，造成細(xì)胞自溶。也稱溶細(xì)胞性感染(cytolytic infection)。細(xì)胞染色體受損。,2、 細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)與功能改變,細(xì)胞融合。

6、 細(xì)胞表面新抗原成分的形成膜通透性異常出現(xiàn)混濁腫脹3 包涵體（inclusion body）形成。 某些病毒感染的細(xì)胞內(nèi)，在普通光學(xué)顯微鏡下，可見在胞漿或胞核內(nèi)出現(xiàn)嗜酸性或嗜堿性染色，大小和數(shù)量不同的圓形或不規(guī)則的團(tuán)塊結(jié)構(gòu)，稱為包涵體.,4 整合作用，使細(xì)胞發(fā)生轉(zhuǎn)化。 病毒的全部或一部分核酸與宿主細(xì)胞的染色體結(jié)合，稱為整合作用（integration）

7、。 整合后的病毒核酸隨細(xì)胞的分裂而傳給子代細(xì)胞，不出現(xiàn)病毒顆粒，細(xì)胞也不被破壞，但細(xì)胞遺傳特性改變可致腫瘤發(fā)生。,病毒感染的類型,一、細(xì)胞水平類型——從感染的結(jié)局來看：溶細(xì)胞型感染穩(wěn)定狀態(tài)感染 整 合 型 感染二、從整體臨床類型；隱性感染；顯性感染；持續(xù)性感染(persistent infection)。,影響病毒毒力和致病性的因素：——病毒宿主相互作用,病毒基因組及其產(chǎn)物的變異，如包膜、衣殼、核心

8、、非結(jié)構(gòu)蛋白以及病毒基因組非編碼區(qū)均可影響病毒的毒力及致病性。宿主因素如遺傳、年齡、內(nèi)分泌、營養(yǎng)、生活習(xí)慣等也是不可忽視的影響因素。,病毒抗原的的提呈與識(shí)別,一、病毒抗原：多為結(jié)構(gòu)蛋白，少數(shù)為非結(jié) 構(gòu)蛋白， 如流感病毒有1種 非結(jié)構(gòu)蛋白和7種結(jié)構(gòu)蛋白， 結(jié)構(gòu)蛋白中5種為內(nèi)部

9、蛋白， 2種為表面抗原。,二、病毒感染細(xì)胞的膜抗原：包括出現(xiàn)的病毒抗原和產(chǎn)生的新抗原。 感染細(xì)胞的表面病毒抗原出現(xiàn)與否與下列因素有關(guān)：（1）病毒增殖環(huán)境。如仙臺(tái)病毒在MDBK細(xì)胞中增殖產(chǎn)生的子代不能產(chǎn)生導(dǎo)致溶血、細(xì)胞融合等與感染有關(guān)的小分子病毒表面抗原。（2）病毒變異。如痘病毒的變異株不產(chǎn)生某些特異性抗原。（3）感染時(shí)間。感染細(xì)胞表面抗原一般在病毒釋放前出現(xiàn)。如新城疫

10、病毒在感染后3小時(shí)、痘病毒為4小時(shí)、單純皰疹病毒為6小時(shí)、麻疹病毒為10~20小時(shí)。,三、抗原的提呈與識(shí)別,1、病毒抗原的提呈（1）MHC-I類分子與病毒抗原提呈 （2）MHC-II類分子與病毒抗原的提呈 2、病毒抗原的識(shí)別 （1）抗體對(duì)病毒抗原的識(shí)別 （2）T細(xì)胞對(duì)病毒抗原的識(shí)別,MHC-I類分子與病毒抗原提呈,病毒侵入----合成病毒蛋白抗原---肽段（被蛋

11、白酶體降解）---形成多肽-MHC-I類分子復(fù)合物---被高爾基體轉(zhuǎn)運(yùn)至細(xì)胞膜表面---被CD8T細(xì)胞的TCR識(shí)別---被激活，分泌穿孔素---殺傷病毒感染的靶細(xì)胞。 這是免疫系統(tǒng)監(jiān)視自身細(xì)胞有無病毒感染及異常分子存在和清除的一種重要方式。,MHC-II類分子與病毒抗原的提呈,胞外游離病毒隨血流和淋巴液途徑不同組織時(shí)也可被APC隨機(jī)捕獲并攝入細(xì)胞內(nèi)。如巨噬細(xì)胞以吞噬、吞飲、吸附和調(diào)理等方式攝取，經(jīng)內(nèi)在化形成吞噬體，后者

12、與溶酶體融合形成內(nèi)體。病毒抗原在內(nèi)體的酸性環(huán)境中被水解成肽段，同時(shí)，在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)中新合成的MHC-II類分子轉(zhuǎn)運(yùn)到內(nèi)體與其內(nèi)具有免疫原性的多肽結(jié)合。所形成的抗原肽-MHC-II類分子復(fù)合物被高爾基體轉(zhuǎn)運(yùn)到APC表面，供CD4+細(xì)胞識(shí)別，并使之激活。,MHC分子與病毒感染的關(guān)系,（1）病毒抗原與MHC分子的相似性：病毒抗原與MHC之間可以發(fā)生免疫交叉反應(yīng)，如EB病毒與慢性類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎有相關(guān)性，病毒胞膜gp110抗原與HLA-DW4、DR?1

13、抗原之間存在有被T細(xì)胞識(shí)別的共同決定簇；HIV的包膜gp41抗原的C端有5個(gè)氨基酸與HLA-II類分子?鏈N端的5個(gè)氨基酸相同。反應(yīng)。,（2）病毒感染可致MHC表達(dá)異常：EB病毒轉(zhuǎn)化的細(xì)胞的B細(xì)胞可使II類分子的表達(dá)顯著增強(qiáng)；經(jīng)12型腺病毒轉(zhuǎn)化的大鼠細(xì)胞在體內(nèi)具有腫瘤原性，而5型腺病毒轉(zhuǎn)化的細(xì)胞則無腫瘤原性。,抗體對(duì)病毒抗原的識(shí)別,機(jī)體感染病毒或接種疫苗后,能產(chǎn)生各種不同的特異性抗體(IgG,IgM,IgA),其中以IgG和IgA最為重

14、要. 病毒表面抗原有些可與相應(yīng)抗體結(jié)合而使病毒失去感染性,也就是發(fā)生中和作用的部位,稱之為中和表位. 它們往往由8~15個(gè)氨基酸組成. 有些病毒抗原只維持病毒結(jié)構(gòu),稱之為非關(guān)鍵部位.,T細(xì)胞對(duì)病毒抗原的識(shí)別,對(duì)已進(jìn)入宿主細(xì)胞的病毒,體液免疫作用受限,主要依賴細(xì)胞免疫發(fā)揮作用. 其中針對(duì)病毒感染細(xì)胞的細(xì)胞免疫主要是指T細(xì)胞介導(dǎo)的特異性細(xì)胞免疫. T細(xì)胞對(duì)病毒抗原的識(shí)別實(shí)際上是對(duì)表達(dá)于細(xì)胞表面的主要組織相容性分子及其提呈的病毒多肽的識(shí)別.

15、T細(xì)胞對(duì)病毒多肽的識(shí)別是由于有T細(xì)胞抗原受體TCR.,抗病毒機(jī)制,一、體液免疫：1、抗體應(yīng)答 ： 特異性抗體的防御作用在病毒感染早期十 分重要。不同Ig類型的抗體在抗病毒免疫中的作用也有所差異。,IgG抗體：是重要的抗病毒抗體，可分為幾種亞類，如人類的IgG1、 IgG2、 IgG3、 IgG4。人類的IgG1是主要的補(bǔ)體結(jié)合抗體和調(diào)理性抗體。IgM抗體：是病毒感染早期產(chǎn)生的主要免疫球蛋白，其產(chǎn)生通常不需要T細(xì)胞的

16、輔助，是出現(xiàn)最早的抗體。IgM抗體在體外實(shí)驗(yàn)中能有效中和病毒。IgA抗體：粘膜免疫屏障的發(fā)育和分泌型IgA的存在對(duì)預(yù)防經(jīng)呼吸道和消化道的病毒感染起重要作用。IgA的防御作用主要是阻斷病毒與粘膜的結(jié)合，而不需吞噬細(xì)胞和補(bǔ)體的參與。,2、抗體的抗病毒作用,（1）中和作用： 機(jī)制為，①抗體覆蓋了病毒的吸附點(diǎn)，從而使其吸附能力降低或喪失，這是最普遍和最重要的中和機(jī)制。②病毒因抗體的作用而凝集，減少了有效的吸附位點(diǎn)。③其它機(jī)制。

17、如流感病毒血凝素HA的單抗作用于病毒顆粒后，病毒顆粒中的RNA多聚酶活性喪失。,（2）增強(qiáng)調(diào)理吞噬作用：針對(duì)病毒表面抗原的非中和抗體，本身不能使病毒的感染性喪失。但抗體與病毒的復(fù)合物可被巨噬細(xì)胞所吞噬，從而使之失去感染性。 (3）溶解殺傷作用：抗體在補(bǔ)體、K細(xì)胞、NK細(xì)胞或巨噬細(xì)胞的協(xié)助下，可以溶解、殺傷病毒及其感染的細(xì)胞。 (4）參與ADCC作用：當(dāng)特異性IgG的Fab段與靶細(xì)胞膜上的病毒抗原決定簇結(jié)合后，其Fc段因構(gòu)型變化而

18、活化，因而與K細(xì)胞上的Fc受體結(jié)合，從而促發(fā)對(duì)靶細(xì)胞的殺傷。,（5）抗體和補(bǔ)體的協(xié)同作用：,●補(bǔ)體覆蓋在已經(jīng)與抗體結(jié)合的病毒外面， 使其難以和相應(yīng)的細(xì)胞受體結(jié)合?！裱a(bǔ)體使結(jié)合有抗體的病毒聚集，減少感染 性的病毒顆粒。 ●通過與病毒/抗體復(fù)合體形成C3b，使病毒 易于被表達(dá)C3b 受體的吞噬細(xì)胞攝入和降解。,●補(bǔ)體可以直接溶解與抗體結(jié)合并含有脂 膜的病毒。 ●補(bǔ)體本身可以不依賴抗體直接滅活病毒。,二

19、、細(xì)胞免疫；,參與抗病毒感染的免疫細(xì)胞有：CTL、NK細(xì)胞、巨噬細(xì)胞。不同的細(xì)胞作用不同，特異性CTL意義重大。,1、細(xì)胞毒T細(xì)胞（CTL）,CTL在病毒感染后的一段時(shí)間出現(xiàn)，其對(duì)病毒感染的靶細(xì)胞的殺傷作用由病毒特異性，并受MHC的限制。一般認(rèn)為CTL對(duì)某些病毒感染的恢復(fù)起重要作用。,CTL對(duì)病毒感染細(xì)胞的特異性：某種病毒誘導(dǎo)的CTL只能殺傷該病毒感染的靶細(xì)胞，并且要求CTL細(xì)胞與靶細(xì)胞的MHC抗原相同。CTL病毒特異性針對(duì)的是特定存在

20、于感染細(xì)胞膜上病毒抗原，而不是針對(duì)完整的病毒顆粒。CTL對(duì)病毒感染靶細(xì)胞MHC限制性：病毒特異性CTL殺傷靶細(xì)胞時(shí)需要同時(shí)識(shí)別細(xì)胞膜表面的病毒抗原和MHC抗原，并且二者具有相同的MHC單倍型時(shí)，殺傷效率高，而當(dāng)二者不相同時(shí)，殺傷效率低，甚至無殺傷作用。,CTL對(duì)病毒感染靶細(xì)胞的殺傷：CTL殺傷靶細(xì)胞時(shí)需要與病毒感染的靶細(xì)胞密切接觸，殺傷機(jī)制不很清楚，但其殺傷過程分三個(gè)階段：①CTL識(shí)別病毒感染的靶細(xì)胞，與其結(jié)合在一起，此階段需要鎂離子

21、。②效應(yīng)細(xì)胞與靶細(xì)胞結(jié)合，激活CTL活性，開始對(duì)靶細(xì)胞不可逆的損傷過程，需鈣離子參與這一過程。③CTL脫離損傷的靶細(xì)胞，靶細(xì)胞自行解體。,病毒特異性CTL殺傷靶細(xì)胞的特點(diǎn)：①預(yù)先由抗原誘導(dǎo)、活化的CTL細(xì)胞可特異性殺傷病毒感染的靶細(xì)胞。②CTL細(xì)胞的殺傷作用受MHC-I類分子限制。③CTL細(xì)胞可連續(xù)殺傷靶細(xì)胞，其殺傷效率高。,2、巨噬細(xì)胞： 單核巨噬細(xì)胞（包括外周血單核細(xì)胞、組織巨噬細(xì)胞和樹突狀細(xì)胞）對(duì)預(yù)防病毒感染和促

22、使病毒感染的恢復(fù)，有重要作用。,其抗病毒感染主要表現(xiàn)在：,（1）直接殺傷病毒 （2）巨噬細(xì)胞能提呈病毒抗原 （3）分泌干擾素 （4）巨噬細(xì)胞表面有IgG的Fc受體，可與IgG 的Fc段結(jié)合,3、自然殺傷細(xì)胞（natural killer cell，NK細(xì)胞）,不需抗原預(yù)先致敏，也不依賴抗體存在，具有自然殺傷病毒感染細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞的能力。,小鼠NK細(xì)胞的特點(diǎn) ：,●新生小鼠NK細(xì)胞活性很低，比成年鼠對(duì)病

23、毒易感●遺傳性NK細(xì)胞缺陷或低水平的小鼠比正常 小鼠對(duì)某些病毒易感●病毒感染可致NK細(xì)胞活性增高●低水平NK細(xì)胞活性的小鼠輸入NK細(xì)胞可 增強(qiáng)抗病毒感染的能力。,NK細(xì)胞殺傷病毒感染靶細(xì)胞機(jī)制 ：,① 結(jié)合階段：NK細(xì)胞非特異性識(shí)別靶細(xì)胞，淋巴細(xì)胞功能相關(guān)抗原-1（LFA-1）和靶細(xì)胞表面的細(xì)胞間黏附分子（ICAM-1）參與NK細(xì)胞的識(shí)別過程。②激活階段：NK細(xì)胞由靶細(xì)胞抗原決定簇激活，這一步驟依賴于鈣離子和適宜的

24、溫度。③效應(yīng)階段：激活的NK細(xì)胞釋放可溶性介質(zhì)（穿孔素），在鈣離子的存在下，單體的穿孔蛋白聚合到靶細(xì)胞膜上，滲入至微脂體中引起2個(gè)不同大小的管道，使膜損傷導(dǎo)致靶細(xì)胞溶解。,,三、細(xì)胞因子的抗病毒作用,細(xì)胞因子是指由活化的免疫細(xì)胞和某些基質(zhì)細(xì)胞分泌的、介導(dǎo)和調(diào)節(jié)免疫及炎癥反應(yīng)的小分子多肽，是除免疫球蛋白和補(bǔ)體外的另一類非特異性免疫效應(yīng)因子。 具抗病毒感染作用的細(xì)胞因子有干擾素、腫瘤壞死因子TNF和白細(xì)胞介素（如IL-2）。,1

25、、干擾素（interferon，IFN） 是機(jī)體受病毒或其它干擾素誘生劑刺激而產(chǎn)生的一組蛋白質(zhì)，具有廣譜的抗病毒、抗腫瘤和免疫調(diào)節(jié)等多種生物學(xué)活性。,干擾素的分類（根據(jù)抗原性的不同 ）：,?-IFN：主要由白細(xì)胞產(chǎn)生 ?-IFN：主要由成纖維細(xì)胞產(chǎn)生 ?-IFN：由活化的T細(xì)胞產(chǎn)生 ?-IFN和?-IFN又稱I型干擾素， ?-IFN又稱II型干擾素。各型干擾素的作用不盡相同，但均有相對(duì)的種屬特異

26、性。,干擾素誘生劑 ：,（1）各種病毒：RNA病毒較DNA病毒的 誘生作用更強(qiáng)。（2）人工合成的雙股核酸鏈。如聚肌胞 （polyI：C）。（3）某些細(xì)菌、脂多糖、促有絲分裂原等。,抗病毒機(jī)制：,IFN本身并無抗病毒作用。IFN誘生劑誘生的IFN從細(xì)胞中釋放后，并非直接作用于病毒，而是通過自分泌和旁分泌作用于自身和鄰近細(xì)胞膜上的IFN受體。當(dāng)IFN與受體結(jié)合后，使細(xì)胞內(nèi)產(chǎn)生一類抗病毒蛋白。這些蛋白有蛋

27、白激酶、寡腺苷酸合成酶E和磷酸二酯酶等。,IFN誘導(dǎo)的抗病毒狀態(tài)的特點(diǎn)：,①有相對(duì)的種屬特異性而無病毒特異性， 有廣譜的抗病毒作用。②作用于細(xì)胞而非直接作用于病毒。③有細(xì)胞間的傳遞性。④作用的暫時(shí)性，一般在體外建立的抗病 毒狀態(tài)只能維持24~72小時(shí)。⑤對(duì)已侵入細(xì)胞內(nèi)增殖的病毒無作用。,2、腫瘤壞死因子TNF 由LPS以及各種侵襲性刺激引起相應(yīng)細(xì)胞分泌的一種可溶性細(xì)胞因子，有TNF-?、和TNF-?兩

28、種類型。前者由單核巨噬細(xì)胞所產(chǎn)生，后者又稱淋巴毒素，主要由淋巴細(xì)胞所產(chǎn)生。,體外抗病毒作用：在多種人細(xì)胞中具有抗病毒活性，如HEL、WI-38、FS-4等，但在BUD-8、WISH等正常細(xì)胞株中無抗病毒活性。 研究結(jié)果不統(tǒng)一，甚至矛盾。確切作用有待更深入的研究。,3、白細(xì)胞介素IL-2 促使T細(xì)胞從G1期轉(zhuǎn)至S期的關(guān)鍵因子，主要由抗原或絲裂原激活的CD4+T細(xì)胞產(chǎn)生，CD8+T細(xì)胞產(chǎn)生量少。

29、 實(shí)驗(yàn)證據(jù)：缺乏功能性T細(xì)胞的無胸腺裸鼠一般均死于接種野生型痘病毒后的播散性感染，實(shí)驗(yàn)證明，如果將整合有鼠源性IL-2基因的重組痘病毒接種裸鼠足墊部，則只引起輕微的腫脹，幾天后即恢復(fù)；即使靜脈接種，體內(nèi)都分離不出病毒。,免疫制品,一、特異性抗體 二、 疫苗三、其它,特異性抗體（被動(dòng)免疫）,●雙特異性抗體 ●嵌合抗體 ●抗獨(dú)特型抗體 1.不能得到足夠抗原的情況下，可用抗獨(dú)特型單抗代替 2.對(duì)含有自身交叉反應(yīng)

30、的非保護(hù)性抗原的病毒用抗獨(dú)特型抗體 可避免自身免疫損傷 3.由于Ab2誘導(dǎo)的保護(hù)性免疫應(yīng)答似乎不具有MHC限制性，使得 由異種動(dòng)物制備的Ab2可用于人體,體液免疫的特點(diǎn),X-specifc Antibody titers,Weeks,,,AntigenX,AntigenX,2,4,6,8,10,12,,,IgM response,IgG response,,病毒感染后的免疫反應(yīng),

31、,,Viraltiters,CTL,Antibody,Days post-infection,7,14,28,35,0,Illness,,免疫的目標(biāo),,,CTL,Antibody,,Vaccine,Infection,,,,CTL,Antibody,,Illness,疫苗,●減毒活疫苗：毒力高度減弱或基本無毒的 變異株，接近于自然感染，有一定的增殖 能力，激發(fā)體液和細(xì)胞應(yīng)答，有毒力回復(fù) 的危險(xiǎn)。 ●滅活疫苗：

32、用物理或化學(xué)方法將病毒殺死 或滅活，不能增殖，有一定的免疫原性， 接種量大，次數(shù)多。,●基因工程疫苗：應(yīng)用基因重組技術(shù)將保護(hù) 性抗原基因重組到適當(dāng)?shù)妮d體，再將重組 體轉(zhuǎn)入到細(xì)胞或細(xì)菌內(nèi)使之表達(dá)相應(yīng)的保 護(hù)蛋白或多肽，經(jīng)純化后的產(chǎn)物即為基因 工程疫苗。因在提純過程中破壞了蛋白質(zhì) 的空間結(jié)構(gòu)，僅能誘導(dǎo)體液應(yīng)答。 ●亞單位疫苗：設(shè)法除去病毒體對(duì)激發(fā)保護(hù)性 免疫無用的甚至有害的

33、成分，保留其有效的 免疫成分，所制成的疫苗稱亞單位疫苗。也 可以說是使用完整的生物體的天然成分的疫 苗。缺點(diǎn)是安全性不夠，對(duì)免疫能力低下者的 風(fēng)險(xiǎn)很大。,● DNA疫苗：將含有病原體保護(hù)性抗原基因 的真核表達(dá)質(zhì)粒DNA直接接種動(dòng)物體內(nèi)，在 動(dòng)物細(xì)胞內(nèi)該質(zhì)粒表達(dá)相應(yīng)抗原，并刺激機(jī) 體的免疫系統(tǒng)引起引起持久的特異性細(xì)胞 免疫及體液免疫應(yīng)答,DNA疫苗的特點(diǎn),①避免制備傳統(tǒng)疫苗的煩

34、瑣過程。②接種后的表達(dá)產(chǎn)物可與MHC-I、II類分子結(jié) 合，無毒力回復(fù)。③免疫時(shí)產(chǎn)生的抗原多肽的提呈過程和自然感 染相似，可誘導(dǎo)細(xì)胞免疫。④具有共同的理化性質(zhì)，可聯(lián)合免疫。⑤可同種異株交叉保護(hù)（基因?yàn)榫幋a保守蛋白 的核酸序列）。,三、其它,1、免疫效應(yīng)細(xì)胞：將具有病毒特異性的CTL回輸，可徹底清楚體內(nèi)病毒。因此，在體外將特異性CTL克隆大量增殖后再回輸將是病毒性疾病治療的一個(gè)重要和有希望的免疫療法。2、以

35、抗原提呈為基礎(chǔ)的免疫： 采用病毒抗原多肽體外致敏APC如樹突狀細(xì)胞，體內(nèi)免疫可大大提高病毒抗原的提呈能力，激發(fā)機(jī)體產(chǎn)生特異性免疫反應(yīng)。,病毒的免疫逃避,一、病毒變異●常見于RNA病毒●中和表位的基因變異株　如HIV、HCV等?！?CTL決定簇的基因變異株 如淋巴細(xì)胞性脈絡(luò)叢腦膜炎病毒。,二、病毒侵犯免疫細(xì)胞　　病毒入侵免疫細(xì)胞（T、B細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、NK細(xì)胞等）后，不易被免疫細(xì)胞或因子清除，或長(zhǎng)期持續(xù)存在，或可在免疫

36、細(xì)胞中增殖，造成免疫功能低下?！　IV、HBV、CMV、風(fēng)疹病毒、麻疹病毒、狂犬病病毒等均可在淋巴細(xì)胞中增殖。,三、病毒感染導(dǎo)致宿主細(xì)胞的MHCⅠ類抗原表達(dá)低下　　CTL殺傷靶細(xì)胞受MHCⅠ類抗原識(shí)別所限制，故當(dāng)病毒感染細(xì)胞表達(dá)MHCⅠ類抗原低下時(shí)，其殺傷作用顯著下降?！　∠俨《荆残停涸缙诘鞍譋３與MHCⅠ類抗原結(jié)合　　腺病毒１２型：阻止MHC基因的轉(zhuǎn)錄或使其mRNA在細(xì)胞核內(nèi)轉(zhuǎn)出　　EB病毒：腫瘤細(xì)胞表面的粘附因子ICAM

37、-1和LFA-3表達(dá)低下　　CMV：從內(nèi)質(zhì)網(wǎng)中除去新合成的MHCⅠ類分子,五、產(chǎn)生非中和抗體或靶細(xì)胞表面病毒抗原發(fā)生變化　　非中和抗體可阻斷中和抗體或淋巴細(xì)胞對(duì)病毒或病毒感染的靶細(xì)胞的殺傷?！　】贵w與補(bǔ)體協(xié)同，使感染病毒的細(xì)胞表面的病毒抗原發(fā)生變化。如麻疹病毒（形成“帽狀”）,六、產(chǎn)生抑制天然免疫和特異性免疫的因子　　產(chǎn)生細(xì)胞因子受體的同源分子?！　《徊《荆篒FN-?、TNF、IL-1　　EB病毒：IL-10,免疫病理學(xué),免

38、疫病理的產(chǎn)生機(jī)制：１、引起免疫抑制，導(dǎo)致慢性感染和多重感染２、ADE作用，增強(qiáng)病毒的致病性３、交叉抗體反應(yīng)導(dǎo)致自身免疫?。础⒉《揪幋a蛋白表達(dá)于細(xì)胞膜上，構(gòu)成靶抗原５、病毒抗原與抗體形成免疫復(fù)合物沉積于小血管,６、激活補(bǔ)體，直接損傷感染細(xì)胞，或通過補(bǔ)體活化過程產(chǎn)生的各種肽類產(chǎn)物，引起炎癥反應(yīng)７、誘導(dǎo)介質(zhì)釋放，造成局部及全身反應(yīng)８、增強(qiáng)細(xì)胞膜表面MHC分子的表達(dá)，促進(jìn)CTL的殺傷作用,產(chǎn)生自身免疫的機(jī)制：１、多克隆B細(xì)胞被激

39、活２、噬淋巴細(xì)胞病毒侵入淋巴細(xì)胞３、由于免疫系統(tǒng)失調(diào)產(chǎn)生抗淋巴細(xì)胞抗體４、病毒感染Ts／Tc細(xì)胞以及作用于細(xì)胞因子，影響其功能５、病毒與正常組織器官之間有交叉抗原６、病毒感染改變了宿主的抗原,登革病毒的感染與免疫,生物學(xué)特性,歸屬于黃病毒科黃病毒屬有四個(gè)血清型，有抗原性交叉為單股正鏈RNA病毒，顆粒為球形編碼３種結(jié)構(gòu)蛋白和７種非結(jié)構(gòu)蛋白,感染類型,大多數(shù)不產(chǎn)生臨床癥狀，但可產(chǎn)生抗體，對(duì)同型病毒的再次感染具有免疫力　　根

40、據(jù)WHO標(biāo)準(zhǔn)，可分為：●登革熱（DF）：高熱，全身肌痛，骨胳和關(guān)節(jié)疼痛，極度乏力，皮疹，淋巴結(jié)腫大和白細(xì)胞減少●登革出血熱和登革休克綜合征（DHF／DSS）：常發(fā)生于再次感染。特點(diǎn)是起病較緩慢，發(fā)熱２－４天后病情突然加重，多個(gè)器官發(fā)生出血。DHF患者若同時(shí)伴有休克，則稱DSS。,致病機(jī)理,感染,,單核巨噬細(xì)胞中增殖,,進(jìn)入血循環(huán),,再定位于單核巨噬細(xì)胞和林巴組織,抗登革病毒抗體可促使病毒在上述細(xì)胞中復(fù)制，并可與病毒形成免疫復(fù)合物，激

41、活補(bǔ)體系統(tǒng)，導(dǎo)致血管通透性增加、白細(xì)胞和血小板減少。從而導(dǎo)致廣泛性出血、體液和蛋白滲出、組織間水腫以及骨、肌肉、關(guān)節(jié)疼痛。,DHF/DSS發(fā)生機(jī)理的假說,抗體依賴性增強(qiáng)（antibody dependent enhancement, ADE）：多數(shù)學(xué)者認(rèn)同。病毒變異學(xué)說：毒力增強(qiáng)的病毒變異株引起DHF/DSS。,機(jī)體對(duì)登革病毒感染的免疫應(yīng)答,●非特異免疫應(yīng)答一、干擾素　　單核細(xì)胞感染12小時(shí)后產(chǎn)生?-IFN，48小時(shí)達(dá)高峰，但不產(chǎn)

42、生?和?-IFN。　　T林巴細(xì)胞再次接觸抗原時(shí)，可產(chǎn)生高滴度的?-IFN。,二、巨噬細(xì)胞　　巨噬細(xì)胞是登革病毒復(fù)制的主要場(chǎng)所。登革２型病毒感染小鼠發(fā)生免疫抑制時(shí)，缺乏細(xì)胞免疫應(yīng)答，同時(shí)對(duì)異型病毒的體液和細(xì)胞免疫受到抑制。三、NK細(xì)胞　　NK細(xì)胞可溶解病毒感染的細(xì)胞，有助于感染的終止。,●特異性免疫應(yīng)答一、細(xì)胞免疫　　登革病毒可促進(jìn)同型病毒致敏的CTL增殖，而異型病毒的促進(jìn)作用較弱，這種促進(jìn)作用受HLA－DR1和HLA－DPW

43、4基因限制。,二、體液免疫初次感染：抗體上升緩慢，抗體水平較低，一般于感染２１天左右出現(xiàn)同型抗體，以IgM為主，以后出現(xiàn)IgG。抗體的特異性較高。再次感染：抗體產(chǎn)生早，滴度上升快，抗體滴度較高。一般于８－９天后就出現(xiàn)抗體，主要為IgG?？贵w的特異性低。,免疫診斷,血凝抑制試驗(yàn)：補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)中和試驗(yàn)ELISA斑點(diǎn)免疫結(jié)合實(shí)驗(yàn),檢測(cè)抗體,檢測(cè)抗原　　上述檢測(cè)抗體的方法經(jīng)改良后可用于抗原的檢測(cè)，但病毒血癥期短，病毒含量低，因此陽

44、性率低。,免疫防治,一、特異性抗體　　理論上抗血清和單抗可用于被動(dòng)免疫，目前仍局限于動(dòng)物實(shí)驗(yàn)。,●減毒活疫苗（傳統(tǒng)和現(xiàn)代）●滅活疫苗●基因工程疫苗●DNA疫苗,二、登革疫苗,重組質(zhì)粒pcDNA-NS1（DEN2，單價(jià)）,CTL具有特異殺傷活性，抗體滴度1:800，保護(hù)率90.9%。,重組質(zhì)粒pcDNA-NS1（DEN3，單價(jià)）,效靶比越高，CTL特異性殺傷百分率也越高。效靶細(xì)胞比例為20:1 時(shí)，特異性CTL 殺傷百分率為32.

45、 5 %,重組質(zhì)粒pcDNA-NS1（DEN3，單價(jià)）,效靶比越高，CTL特異性殺傷百分率也越高。效靶細(xì)胞比例為20:1 時(shí)，特異性CTL 殺傷百分率為32. 5 %,重組質(zhì)粒pcDNA-NS1和pcDNA-NS1 （聯(lián)合免疫，DEN2，單價(jià)）,中和抗體效價(jià)最高1:32；雙質(zhì)粒免疫組高于單質(zhì)粒免疫組，最高為1:30。,以pIRES構(gòu)建四價(jià)疫苗（DEN1-4）,同時(shí)產(chǎn)生針對(duì)登革病毒４個(gè)血清型的抗體，最高抗體滴度為1:160。,思考題：