31297.斑馬魚虹彩病毒感染免疫相關(guān)基因的篩選與功能研究

1、中山大學(xué)博士學(xué)位論文斑馬魚虹彩病毒感染免疫相關(guān)基因的篩選與功能研究姓名：齊麟申請學(xué)位級(jí)別：博士專業(yè)：生物化學(xué)與分子生物學(xué)指導(dǎo)教師：徐安龍20090610中山大學(xué)博士學(xué)位論文：斑馬魚虹彩病毒感染免疫相大基因的篩選與功能研究抗性相關(guān)、細(xì)胞骨架、生物合成、能量相關(guān)、蛋白修飾、細(xì)胞凋亡、轉(zhuǎn)錄和翻譯因子、代謝相關(guān)、病毒相關(guān)和其它共lO個(gè)大類的基因。其中，生物合成類基因所占比例最大，達(dá)到247％，抗性和免疫相關(guān)基因占233％。推測這兩類基因在斑馬魚

2、感染ISKNV后具有重要的意義。(3)系統(tǒng)研究了一個(gè)TNF家族成員(TTRAP)在抗病毒感染免疫中的作用。研究發(fā)現(xiàn)：TTRAP在斑馬魚感染ISKNV后明顯上調(diào)，與病毒感染正相關(guān)。對TTRAP在正常成魚各組織和胚胎發(fā)育時(shí)期表達(dá)譜進(jìn)行了研究，證實(shí)TTRAPmRNA水平在除腦以外的lO個(gè)組織中都有表達(dá)，在腸道等與黏膜免疫密切相關(guān)的組織中高表達(dá)；胚胎發(fā)育方面，從魚卵受精后6小時(shí)到48小時(shí)，TTRAPmRNA水平持續(xù)上升，之后保持穩(wěn)定。通過激光共

3、聚焦分析發(fā)現(xiàn)全長TTRAP定位于細(xì)胞核中，且核定位信號(hào)位于TTRAP蛋白的N端。TTRAP是TNF家族中具有負(fù)調(diào)控功能的轉(zhuǎn)錄因子，一方面，能增強(qiáng)IFN信號(hào)通路，推測TTRAP具有抗病毒功能；另一方面，能抑制NF1cB信號(hào)通路，推測TT凡鐘具有防止病毒通過對抗調(diào)亡逃避宿主免疫清除的功能。成功構(gòu)建TTRAP原核表達(dá)載體，誘導(dǎo)表達(dá)出融合蛋白，并獲得兔源多克隆抗體，為具體功能研究奠定了基礎(chǔ)。(4)對斑馬魚急性應(yīng)答蛋白血清淀粉樣蛋白A(serum

4、amyloid氣SAA)進(jìn)行初步功能研究并發(fā)現(xiàn)：SAA除對細(xì)菌和細(xì)菌內(nèi)毒素敏感外，對病毒和病毒純組份PolyI：C的刺激同樣表現(xiàn)出急性應(yīng)答作用。定量PCR研究表明，SAA在生殖器官卵巢和精巢中高表達(dá)。首次發(fā)現(xiàn)斑馬魚SAA廣譜的菌結(jié)合能力，除有報(bào)道的格蘭氏陰性菌外，還能直接結(jié)合兩種格蘭氏陽性菌(Saureus和Sepidermidis)。對免疫相關(guān)信號(hào)通路進(jìn)行分析發(fā)現(xiàn)，斑馬魚SAA能激活NFrB和ISRE信號(hào)通路，推測SAA具有增強(qiáng)炎癥效