間接elisa法測定抗人血清白蛋白效價

1、1間接間接ELISAELISA法測定抗人血清白蛋白效價法測定抗人血清白蛋白效價作者：ZP（成都醫(yī)學院檢驗醫(yī)學院09級醫(yī)學檢驗本科二班，610500）【摘要摘要】目的目的通過運用間接ELISA法，來測定抗人血清白蛋白的效價。方法方法用抗原、酪蛋白分別包被、封閉微孔板，再加入待檢血清、一抗、二抗，建立間接包被模式酶聯(lián)免疫法。經(jīng)方陣滴定確定抗原和酶標抗體的最適濃度后，測定抗體效價。結果結果在包被的人ALB濃度為0.1ugml，二抗1：2000

2、0的稀釋倍數(shù)時，測出的抗人ALB的效價范圍為1：51200。結論結論運用間接ELISA法，在檢測抗人ALB的靈敏度高，優(yōu)化了反應條件，可用于初步抗人ALB的檢測?！娟P鍵詞關鍵詞】間接ELISA；抗人血清白蛋白；效價；羊抗人ALB、兔抗羊IgGHRP間接ELISA法，是目前最常用的方法，因其靈敏度高，操作簡便而被運用廣泛。此方法是測定抗體最常用的方法，屬于非競爭結合試驗。其原理是將抗原連接到固相載體上，樣品中待測抗體與之結合成固相抗原受檢

3、抗體復合物，再用酶標二抗與固相免疫復合物中的抗體結合，形成固相抗原受檢抗體酶標二抗復合物，測定加底物后的顯色程度，確定待測抗體含量。此次試驗就是用間接ELISA測定未知的抗人ALB的效價。1、主要試劑、儀器、材料及主要溶液的配制、主要試劑、儀器、材料及主要溶液的配制1.1主要試劑主要試劑：人ALB標準品（250mg支）；一抗(羊抗人ALB，效價1:701ml瓶，批號：201106貯存于4～20℃，有效期：2年)；二抗(兔抗羊IgGHRP

4、，購自武漢博士德生物工程有限公司)；顯色劑：A液、B液，ME002可溶性TMB顯色液；終止液（2MH2SO4）；包被液：0.05MPH9.6碳酸鹽緩沖液；洗滌液0.05%TWEENPBS；PBS緩沖液0.1MPH7.4；封閉液1%酪蛋白PBST.1.21.2儀器：儀器：洗板機（BIORADMODEL1575）、孵箱（上海恒科學儀器有限公司型號：DHP9272）、SM3自動化酶免疫分析儀（北京天石醫(yī)療用品制作所）1.31.3材料：材料：9

5、6孔酶標板、一次性塑料試管、加樣槍（上海求精生化試劑儀器有限公司）1.4主要溶液的配制：主要溶液的配制：1)、0.05MolLPH96的碳酸鹽緩沖液（包被稀釋液）：準確稱取1.6g碳酸鈉，2.9g碳酸氫鈉于燒杯中加水適量使溶解，用去離子水定溶于1L的容量瓶中，同時調節(jié)PH值至9.6；2)、PH7.4PBS緩沖液:準確稱取氯化鈉8g，氯化鉀0.2g，十二水和磷酸氫二鈉3.58g，磷酸二氫鉀0.2g于燒杯中，用去離子水定溶于1L的容量瓶中，

6、同時調節(jié)PH值至7.4；3)、封閉液1%酪蛋白PBST：準確稱取3g酪蛋白于以潔凈燒杯中，再加入300mlPBS溶液和150ulTween20。將燒杯置于電爐上邊攪拌邊加熱，直至酪蛋白完全溶解；4)、洗滌液0.05%TWEENPBS：向1000mlPH7.4PBS緩沖液中加入500μlTween20。PBST既是洗板液也是溶解封閉劑酪蛋白（1%）的溶解試劑，配方為PBSTween20.2、方法、方法2.1微孔板制備微孔板制備：將96孔板

7、劃分為四個區(qū)域，每個區(qū)域4行6列。在1至4區(qū)的每微孔中分別加入100ul濃度為10μgml、1μgml31：10000，1：20000加入，（如表2所示），其他步驟同上2.1～2.3所述。表23、結果、結果3.13.1酶標抗體工作濃度的結果酶標抗體工作濃度的結果預實驗檢測人ALB的最適濃度和兔抗羊HRP最適比例，測得的光密度（OD值）：表3實驗結果顯示：本次預實驗中，4種不同包被抗原濃度組的結果均出現(xiàn)了不同程度跳躍，未出現(xiàn)正確的梯度變化

8、，且背景太高，背景過高導致所有組均無法進行線性分析，所以預實驗失敗。根據(jù)全班8個96孔板中篩選出包被抗原在0.01μgml和0.1μgml，二抗?jié)舛仍?：10000和1:20000的條件下，得出稍微有梯度的數(shù)據(jù)。3.23.2待測血清效價的確定實驗結果待測血清效價的確定實驗結果一抗一抗二抗二抗1:1001:1001:2001:2001:4001:4001：8008001:16001:16001:32001:32001:64001:6400

9、1:128001:128001:256001:256001:512001:512001:1024001:102400PBSPBS1:100001:100001:200001:200001:100001:100001:200001:200001234567891011121.9632.2532.0002.1382.1951.8231.6091.8441.7911.9921.8671.3801.9251.7351.8512.0412.091

10、1.7961.8351.9131.8431.6571.6441.5681.6191.8211.5961.3281.3771.1201.6931.5211.7441.0931.5150.9090.7860.6140.6100.5130.4270.0690.8201.0100.4300.3130.2540.6121.7651.5221.6581.7501.8711.7291.4261.6961.6402.0640.1381.5141.676