即墨野生大豆(glycinesojasieb.etzucc)的營養(yǎng)評價及其胰蛋白酶抑制劑的研究

1、摘 要 i 即墨野生大豆(Glycine soja Sieb.et Zucc)的營養(yǎng)評價及其 胰蛋白酶抑制劑的研究 摘 要 我國是世界上野生大豆分布最多的國家。 野生種擁有栽培種所缺乏的具有潛在應(yīng)用價值的豐富變異， 是作物改良的重要基因來源。 野生大豆種子的蛋白質(zhì)含量高于栽培大豆， 野生大豆具有較強的抗逆性和適應(yīng)能力可能與胰蛋白酶抑制劑（Trypsin inhibitor, TI）在野生大豆中的表達量高于栽培大豆有關(guān)。鑒于

2、野生大豆胰蛋白酶抑制劑 （Wild soybean trypsin inhibitor, WSTI） 的高表達及良好的生物學活性， 認為有必要對其進行系統(tǒng)的研究。 通過開展對即墨野生大豆資源的研究，本論文可為合理地保護和利用野生大豆這種生物資源提供一定的理論依據(jù)和數(shù)據(jù)資料。 本文首先對產(chǎn)自即墨的野生大豆進行了營養(yǎng)價值評價。 通過凝膠過濾層析和親和層析，借助建立的熒光分光光度法檢測胰蛋白酶抑制劑活性，分離得到WSTI， 并對其結(jié)構(gòu)及性質(zhì)進

3、行了研究。提取野生大豆總 RNA 后，反轉(zhuǎn)錄后經(jīng)巢式 PCR 擴增出 WSTI 目的基因測序并做生物信息學分析。主要結(jié)果如下： （1） 以市售栽培大豆為對照， 對即墨野生大豆的主要營養(yǎng)成分進行對比分析。結(jié)果表明：即墨野生大豆的蛋白質(zhì)含量為 40.74%，脂肪含量為 16.91%，總糖含量為 11.26%，與栽培大豆無顯著差異；野生大豆含有較多的鐵、鈣元素，但鋅、鎂元素含量較低。 野生大豆脂肪酸種類比栽培大豆少 4 種， 但亞油酸和亞麻酸

4、含量遠高于栽培大豆；野生大豆氨基酸總量高于栽培大豆，其中谷氨酸含量最高，第一限制氨基酸為含硫氨基酸；必需氨基酸指數(shù)(EAAI)、生物價(BV)、營養(yǎng)指數(shù)(NI)和氨基酸比值系數(shù)(SRCAA)分別比栽培大豆高出 5.41%、5.9%、1.02%和3.71%，說明即墨野生大豆營養(yǎng)成分全面且均衡，可作為優(yōu)質(zhì)蛋白質(zhì)原料進行利用。 （2）對熒光分光光度法測定大豆胰蛋白酶抑制劑的條件進行優(yōu)化。通過建立 AMC 標準曲線，得到抑制劑活力計算公式：U=

5、（F-300.4）/1.19。該條件下測得的胰蛋白酶抑制劑濃度在 0.1 μg/mL~0.7 μg/mL 范圍內(nèi)，與反應(yīng)速度存在一定的線性關(guān)系， 檢出限約為 8.30 ng/mL，適用于后續(xù)純化過程中胰蛋白酶抑制劑摘 要 iii 氨基和 47 個極性氨基酸。氨基酸序列中含有 BBI 家族的保守序列，其中 62 位的蘇氨酸和 63 位的賴氨酸構(gòu)成其蛋白酶結(jié)合位點， Cys60、 Thr61、 Lys62、 Cys68、Cys87