香菇原生質(zhì)體外文翻譯--擁有再生能力和交配型穩(wěn)定性的香菇原生質(zhì)體的高收益制備

1、 中文 4880 字外文翻譯 外文翻譯擁有再生能力和交配型穩(wěn)定性的香 擁有再生能力和交配型穩(wěn)定性的香菇原生質(zhì)體的高收益制備 菇原生質(zhì)體的高收益制備High Yield Preparation of Lentinus edodes (“Shiitake“)Protoplasts with Regeneration Capacityand Mating Type Stability 華中農(nóng)業(yè)大學本科畢業(yè)論文外文翻譯2試劑：Sanpearl

2、 CP，BSD、LS和本質(zhì)素： 為Sara-／okokusaku果醬公司和Tokyo kase~公司生產(chǎn)，纖維索酶y—c：東京Selhn制藥公司生產(chǎn)jN一乙酰胞壁酶SG，東京Seikagaku kogyo公司生產(chǎn)，麥芽汁、酵母汁：美國Difco公司生產(chǎn)瓊脂：日本東京kyokuto公司生產(chǎn)。原生質(zhì)體的制備：收集液體培養(yǎng)的菌絲于培養(yǎng)皿內(nèi)，使用剃刀（ ather—Anzen—kamisorl公司生產(chǎn)）蔣其輕輕擠切成微小菌絲片段，然后用孔徑為1

3、29微米的尼龍網(wǎng)過濾，將微小菌絲片段收集，接種到l0ml含有0.4%Sanpeatl Cp和0.005％木質(zhì)紊的MYG培養(yǎng)液中（100ml三角瓶容器內(nèi)）。在25℃、相對濕度70%、l2小時晝夜變化節(jié)律條件下，靜止培養(yǎng)4天，幼齡菌絲用含0.6M甘露醇的0.05M丁二酸緩沖液洗滌，輕輕擠出水分， 以每毫升混合酶液含1 00-120毫克菌絲的比倒與2一3%纖維素酶Onozaka RS和0.1%(4 0U／m!、Sigma)幾丁質(zhì)酶組成的混合酶

4、液混臺，30℃下在20mI帶塞小瓶中進行酶解反應(yīng)?；旌厦敢涸诤?.6M 甘露醇的0.05M丁二酸緩沖液中配制，PH4.6。原生質(zhì)體的再生菌落的形成： 運用上述方法制各的原生質(zhì)體用孔徑為60微米的尼龍網(wǎng)過濾，血球計數(shù)板計數(shù)， 用再生培養(yǎng)液梯度稀釋到l0 -4。再生培養(yǎng)液為MYG 中加入0.4%Sanpearl cP和0.6M蔗糖， 即MYG—CP—s培養(yǎng)基。取200微升梯度稀釋的原生質(zhì)體懸液涂到1.2%瓊脂的MYG—cP—s再生培養(yǎng)皿上（

5、直徑6.0厘米）。在25℃、相對濕度70% 、12小時晝夜節(jié)律條件下培養(yǎng)。14天以后以培養(yǎng)皿中菌落的數(shù)量來計算再生率， 出現(xiàn)在不含滲透壓穩(wěn)定劑的培養(yǎng)皿上的，不是從原生質(zhì)體再生出來的菌落數(shù)量作為對照從中扣除。交配型的檢驗：每一個單核菌絲的交配型通過在瓊脂培養(yǎng)基平板上雙配對培養(yǎng)(Confronfing Culture)確定， 由A ≠B≠親合配對形成的雙核菌絲的鎖狀聯(lián)合和由A≠B=配對形成的假鎖狀聯(lián)合通過顯微鏡檢查確定，由A≠B=配對， 將

6、兩個單核菌絲的微量尖端菌絲混合接種到液體培養(yǎng)基內(nèi)培養(yǎng)以進一步確證其假鎖狀聯(lián)合是否存在。融合處理： 聚乙二醇(PEG)誘導原生質(zhì)體融合的方法同前所述，30%PEG4000溶于0.01M氯億鈣的0.05M馬來酸鈉緩沖液中，PH5.5。子實體的形成：小規(guī)模術(shù)屑栽培方法基本上同前所述。Saapearl cp以0.4%的量添加到培養(yǎng)料內(nèi)，經(jīng)過30-40培養(yǎng)，用80毫升無菌水傾注到燒杯中，保持16.5℃過夜， 然后將水傾析出來， 然后培養(yǎng)仍保持在1