刺芒氨基二硫代甲酸酯衍生物1121的合成及對PC3細(xì)胞的活性研究.pdf

1、文獻(xiàn)報(bào)道，異黃酮在自然界廣泛存在并且有較好的抗腫瘤藥理活性，很多含有氨基二硫代甲酸酯結(jié)構(gòu)片段的化合物也具有較高的抗腫瘤活性。課題組前期基于分子拼合原理設(shè)計(jì)合成了一系列異黃酮的氨基二硫代甲酸酯類衍生物，并檢測了它們在不同腫瘤細(xì)胞株中的抑制活性。結(jié)果顯示編號為1121的化合物活性最佳，并對前列腺癌細(xì)胞 PC3具有明顯的抗增殖活性。因此我們主要選擇化合物1121深入研究其對前列腺癌細(xì)胞的作用機(jī)制。主要研究結(jié)果如下：
　　1. MTT結(jié)果

2、顯示在胃癌細(xì)胞株（MGC803）、食管癌細(xì)胞株（EC109）和前列腺癌細(xì)胞株(PC3)中，1121對PC3細(xì)胞顯示出抗增殖作用。其中1121在PC3細(xì)胞株的IC50值為1.04±0.047，優(yōu)于陽性對照藥5-FU。
　　2.為了檢測化合物1121是否引起PC3細(xì)胞死亡并且確定細(xì)胞死亡類型，我們用流式細(xì)胞術(shù)檢測化合物1121處理PC3細(xì)胞之后的Annexin V-FITC和PI染色比例。結(jié)果顯示1121并不引起PC3細(xì)胞出現(xiàn)細(xì)胞死亡

3、，也并未引起凋亡相關(guān)蛋白（Bax、Caspase3、PARP）的激活或表達(dá)變化。
　　3. MTT法檢測化合物1121對于PC3細(xì)胞增殖的影響，結(jié)果顯示1121可以明顯減緩PC3細(xì)胞的生長；同時(shí)結(jié)晶紫染色法檢測結(jié)果也顯示隨著1121濃度的增加，PC3細(xì)胞的克隆形成率明顯降低。
　　4.細(xì)胞有絲分裂周期受到阻滯將抑制癌細(xì)胞增殖。流式細(xì)胞術(shù)檢測結(jié)果顯示1121在PC3細(xì)胞中引起了明顯的G1期阻滯。CDK4和Cyclin D1是調(diào)

4、節(jié)細(xì)胞周期從G1期向S期轉(zhuǎn)化的重要因素。我們通過Western Blotting方法檢測到CDK4和Cyclin D1蛋白表達(dá)量隨著1121濃度的增加而減少。
　　5. MAPK信號通路的激活伴隨著連續(xù)性的酪氨酸激酶磷酸化，與細(xì)胞增殖緊密相關(guān)。由Western Blotting結(jié)果可知1121明顯抑制了MAPK通路相關(guān)蛋白 ERK、c-Jun、p38的磷酸化。因此，1121可以在一定程度上通過抑制MAPK通路活性來發(fā)揮抗增殖作用。

5、
　　6.腫瘤在體內(nèi)轉(zhuǎn)移也是造成其很難根治的原因之一。本實(shí)驗(yàn)采取了 Transwell板來評價(jià)1121對PC3細(xì)胞的抗轉(zhuǎn)移能力。結(jié)果表明隨著1121濃度增加，轉(zhuǎn)移到上室下表面的細(xì)胞數(shù)量依次降低。另外 Wnt信號通路的激活伴隨Axin、GSK3β、APC等蛋白量降低和β-Catenin增加導(dǎo)致細(xì)胞轉(zhuǎn)移能力增強(qiáng)。Western Blotting實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明1121顯著增加了 Axin并同時(shí)降低了β-Catenin的表達(dá)水平，也檢測到