苯并咪唑衍生物BM935抑制T細胞增殖的效應與機制研究.pdf

1、目的：探索苯并咪唑衍生物BM935抑制T細胞增殖的效應與機制，為尋找BM935的作用靶點奠定基礎。
　　方法：
　　1.使用MACS系統(tǒng)分離人和小鼠的CD3+T細胞，并通過流式細胞術結合熒光標記的anti-CD3檢測T細胞純度。
　　2.流式細胞儀結合CFSE染色檢測絲裂原或anti-CD3/CD28刺激的人與小鼠T細胞增殖反應。
　　3.流式細胞儀結合PI染色對活細胞進行絕對計數。
　　4.使用流式細胞儀

2、檢測T細胞的細胞周期和CD25表達。
　　5.ELISA檢測anti-CD3/CD28刺激的人T細胞培養(yǎng)上清中IL-2、IL-4、IL-6、IL-10、IL-17A和IFN-γ的含量。
　　6.采用IL-2長時間培養(yǎng)PBMC的方法，獲得高純度T細胞。流式細胞儀檢測BM935對IL-2刺激T細胞增殖抑制作用。
　　7.Annexin和PI雙染色檢測凋亡和死亡的T細胞。
　　結果：
　　1.MACS方法分離的人

3、和小鼠的T細胞，純度大于95％。
　　2.BM935能有效抑制絲裂原或anti-CD3/CD28刺激的人與小鼠T細胞增殖反應，IC50均在1-2μM之間。
　　3.BM935有效抑制T細胞增殖的濃度不影響人或鼠靜息T細胞存活。
　　4.BM935不抑制T細胞活化表達CD25,通過阻滯活化的T細胞周期在G0/G1期，從而抑制T細胞增殖。
　　5.BM935不抑制T細胞分泌IL-2、IL-4、IL-10，但抑制IFN

4、-γ、IL-6、IL-17A的分泌。
　　6.IL-2長時間培養(yǎng)PBMC，可得到純度大于95%的T細胞。BM935能有效抑制IL-2刺激的T細胞增殖。
　　7.高濃度BM935在抑制IL-2刺激的T細胞增殖的同時，不會促進T細胞發(fā)生凋亡，其凋亡和死亡細胞比例與多種對照藥物作用組無明顯差異。
　　結論：
　　BM935對靜息T細胞沒有明顯的細胞毒性，能選擇性地抑制T細胞增殖。BM935不通過抑制T細胞活化或者誘導T