N-連接蛋白質(zhì)糖基化分析用微流控芯片平臺和方法研究.pdf

1、蛋白質(zhì)糖基化在許多生物和生理過程中發(fā)揮著重要的作用,進(jìn)行蛋白質(zhì)糖基化的分析在蛋白質(zhì)組學(xué)以及藥物篩選的研究中具有重要的意義.本論文分別以寡糖鏈、糖肽以及整個糖蛋白(糖形)為分析對象,進(jìn)行以微流控芯片和質(zhì)譜或者二者聯(lián)用為基礎(chǔ)的 N-連接蛋白質(zhì)糖基化分析平臺和方法的研究.主要內(nèi)容包括: 在微流控芯片上實(shí)現(xiàn)了簡單糖的快速電泳分離和直接、間接激光誘導(dǎo)熒光檢測；發(fā)展了以芯片電泳與外切糖苷酶酶解結(jié)合,激光誘導(dǎo)熒光檢測為基礎(chǔ),以糖肽為分析對象的

2、糖鏈結(jié)構(gòu)類型分析方法,對火雞卵白蛋白的糖鏈結(jié)構(gòu)進(jìn)行推測,結(jié)果表明該蛋白含有高甘露糖型和雜合型的糖鏈；設(shè)計(jì)并制備了一種集成化凝集素親和微流控芯片.在通道內(nèi)構(gòu)建以整體材料為載體的微米級的凝集素親和柱,以電滲流為驅(qū)動力,在微流控芯片上實(shí)現(xiàn)了傳統(tǒng)凝集素親和色譜的全過程,用豌豆凝集素親和芯片對糖蛋白的糖形進(jìn)行分析,根據(jù)其糖鏈與豌豆凝集素結(jié)合能力的不同將糖形分為與該凝集素不結(jié)合、弱結(jié)合和強(qiáng)結(jié)合的組分.該芯片具有耗樣量少、分析快速以及操作簡單的優(yōu)點(diǎn).