多肽藥物MMI-0100在阿爾茨海默病小鼠模型中的作用機(jī)制研究.pdf

1、p38絲裂原活化蛋白激酶(p38mitogen-activated protein kinases，p38MAPK)是MAPK激酶家族之一。已有大量研究報(bào)道p38MAPK/MK2信號(hào)通路參與調(diào)控細(xì)胞應(yīng)激、炎癥、凋亡等。針對(duì)該靶點(diǎn)，p38MAPK抑制劑(SB203580等)被開(kāi)發(fā)研究，但因臨床階段出現(xiàn)的諸多安全隱患（肝毒性、心臟毒性、中樞神經(jīng)系統(tǒng)毒性等），限制了其應(yīng)用和發(fā)展。由此，下游底物MK2作為調(diào)控炎癥反應(yīng)的新型藥物靶標(biāo)成為目前研究的

2、熱點(diǎn)；近來(lái)設(shè)計(jì)合成的多肽藥物MMI-0100是對(duì)MK2有抑制作用的外源治療性多肽。且在外周炎癥病變研究中表明有良好功效，基于此，MMI-0100靶向抑制p38MAPK/MK2信號(hào)通路可能對(duì)神經(jīng)炎癥病變也具有較好的調(diào)控作用。
　　阿爾茨海默病(Alzheimer's disease，AD)是主要影響海馬和皮質(zhì)腦區(qū)的神經(jīng)退行性疾病，病因復(fù)雜不明。但長(zhǎng)期慢性的神經(jīng)炎癥反應(yīng)引起神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞持續(xù)激活和炎癥介質(zhì)的連續(xù)釋放是導(dǎo)致神經(jīng)元死亡并形成

3、腦疾病的重要過(guò)程。本課題主要觀察MMI-0100能否通過(guò)抑制神經(jīng)炎癥減輕小鼠AD模型中的認(rèn)知損傷。結(jié)果：①采用小鼠新物體(NOR)和新位置(OLR)記憶識(shí)別模型，由Aβ42及LPS誘導(dǎo)神經(jīng)炎癥形成小鼠記憶損傷，發(fā)現(xiàn)給藥MMI-010024h后，小鼠記憶損傷被減緩，并表現(xiàn)出與生理鹽水組無(wú)顯著性差異的記憶水平；②通過(guò)免疫組化實(shí)驗(yàn)，分析CD11b和GFAP蛋白表達(dá)量，確定小鼠海馬中小膠質(zhì)細(xì)胞及星形膠質(zhì)細(xì)胞參與的炎癥免疫應(yīng)答情況，發(fā)現(xiàn)MMI-0

4、100可以顯著降低LPS引起的CD11b和GFAP的高表達(dá)，即MMI-0100能降低CNS中免疫細(xì)胞的持續(xù)激活，維持其處于靜息狀態(tài)；③在組織水平，實(shí)時(shí)定量PCR分析發(fā)現(xiàn)MMI-0100可以顯著降低由Aβ42和LPS誘導(dǎo)的炎癥因子(IL-6、IL-1β、TNF-α、iNOS)高表達(dá)，且在Western blot檢測(cè)中發(fā)現(xiàn)MMI-0100可通過(guò)抑制ERK磷酸化來(lái)調(diào)控炎癥反應(yīng)，而p38MAPK可能在海馬組織蛋白提取過(guò)程中被降解，因而未能確定其

5、磷酸化水平；④在BV-2細(xì)胞系中檢測(cè)發(fā)現(xiàn)MMI-0100為10-7M時(shí)能夠顯著降低LPS誘導(dǎo)的小鼠神經(jīng)炎癥中炎癥因子(IL-6、IL-1β、iNOS及COX-2)表達(dá)，且能夠濃度依賴(lài)性的降低ERK和p38MAPK磷酸化水平，表明MMI-0100可能是通過(guò)抑制ERK和p38MAPK通路來(lái)降低LPS引起的炎癥反應(yīng)；⑤MMI-0100是具有細(xì)胞穿膜活性的治療性多肽，有趣的是，鼻黏膜給藥MMI-0100后，由Aβ42和LPS引起的小鼠NOR和O