高F值玉米寡肽-鋅、硒螯合物的制備及生理活性研究.pdf

1、玉米加工的副產(chǎn)物玉米黃粉經(jīng)復(fù)合酶解后得到的高F值玉米寡肽不僅具有多種生物活性，而且還能促進(jìn)微量元素鋅、硒在生物體內(nèi)的吸收。本文以高F值玉米寡肽和硫酸鋅、亞硒酸鈉為原料，制備高F值玉米寡肽-鋅、硒螯合物，并對其進(jìn)行分離純化和結(jié)構(gòu)鑒定，最后研究了螯合物的補(bǔ)鋅和補(bǔ)硒效果、抗氧化及醒酒保肝活性。通過單因素實(shí)驗(yàn)和響應(yīng)面設(shè)計，確定高F值玉米寡肽-鋅螯合反應(yīng)的最優(yōu)條件，結(jié)果表明，獲得的最優(yōu)條件為:肽鋅摩爾比2.08∶1，pH6.08，溫度60.58℃

2、，反應(yīng)時間40 min，最優(yōu)條件下制得的高F值玉米寡肽-鋅螯合物中鋅的螯合率為77.90％，純度為77.98％。
　　本研究主要內(nèi)容包括：⑴利用葡聚糖凝膠G-15和C-18反相高效液相對高F值玉米寡肽-鋅螯合物進(jìn)行分子量測定和組分分析:高F值玉米寡肽-鋅螯合物的平均分子量在337左右，且分離得到了組分P-Zn3a和組分P-Zn3b。運(yùn)用紫外吸收光譜、電噴霧電離質(zhì)譜和紅外吸收光譜研究高F值玉米寡肽-鋅螯合物的結(jié)構(gòu)。紫外全波長掃描結(jié)果

3、顯示，硫酸鋅的最大吸收波長在192 nm，高F值玉米寡肽的最大吸收波長在220 nm，高F值玉米寡肽-鋅螯合物的最大吸收波長在209nm;采用MALDI-TOF/TOF MS/MS對組分進(jìn)行測序，氨基酸序列為甘氨酸-纈氨酸-亮氨酸（異亮氨酸）(Gly-Val-Leu(Ile))和甲硫氨酸-亮氨酸（異亮氨酸）(Met-Leu(Ile));紅外光譜結(jié)構(gòu)表征顯示高F值玉米寡肽與鋅離子螯合機(jī)制為:與Zn2+發(fā)生螯合的位置可能是-NH-C=O上的

4、-NH，-COOH上的-OH和末端-NH2。由此可推斷高F值玉米寡肽與鋅發(fā)生了螯合并產(chǎn)生了一種新型的螯合物。⑵自制缺鋅飼料飼喂小鼠成功構(gòu)建缺鋅模型。缺鋅可使小鼠食欲不振，抑制其生長發(fā)育，同時肝臟鋅、血清鋅含量及堿性磷酸酶活性均降低。經(jīng)過20 d補(bǔ)鋅后，缺鋅小鼠的飲食恢復(fù)正常，活動狀況良好。在補(bǔ)鋅劑量相同的情況下，高F值玉米寡肽-鋅螯合物組飼料的生物利用度最高，其次是甘氨酸鋅組、葡萄糖酸鋅組，生物利用度最低的是硫酸鋅組。高F值玉米寡肽-鋅

5、螯合物可以顯著性提高小鼠肝臟鋅和血清鋅含量，同時還明顯提高了堿性磷酸酶活性。這說明高F值玉米寡肽-鋅螯合物是一種良好的補(bǔ)鋅劑。與缺鋅組相比，高F值玉米寡肽-鋅螯合物組顯著降低MDA含量，顯著提高總抗氧化能力，顯著增強(qiáng)SOD活力，這說明高F值玉米寡肽-鋅螯合物具有明顯的抗氧化活性，是一種良好的抗氧化劑。與對照組相比，高F值玉米寡肽-鋅螯合物組顯著縮短小鼠的醒酒時間，顯著降低ALT和AST活性，說明高F值玉米寡肽-鋅螯合物具有醒酒保肝的活性

6、。⑶通過單因素實(shí)驗(yàn)和響應(yīng)面設(shè)計，確定高F值玉米寡肽-硒螯合反應(yīng)的最優(yōu)條件，結(jié)果表明，獲得的最優(yōu)條件為:肽硒質(zhì)量比1.17∶1，pH7.22，溫度70.28℃，肽濃度5％，反應(yīng)時間60min，最優(yōu)條件下制得的產(chǎn)物中硒的螯合率為56.81％，純度為71.13％。⑷利用葡聚糖凝膠G-15和C-18反相高效液相對高F值玉米寡肽-硒螯合物進(jìn)行分子量測定和組分分析:高F值玉米寡肽-硒螯合物的平均分子量在348左右，且分離得到了組分P-Se3a和組分

7、P-Se3b。運(yùn)用紫外吸收光譜、電噴霧電離質(zhì)譜和紅外吸收光譜研究高F值玉米寡肽-硒螯合物的結(jié)構(gòu)。紫外全波長掃描結(jié)果顯示，高F值玉米寡肽-硒螯合物樣品在波長232nm附近出現(xiàn)新的吸收峰，吸光度強(qiáng)弱和位置均不同于高F值玉米寡肽;采用MALDI-TOF/TOF MS/MS對組分進(jìn)行測序，氨基酸序列為甘氨酸-纈氨酸-亮氨酸（異亮氨酸）(Gly-Val-Leu(Ile))和甲硫氨酸-亮氨酸（異亮氨酸）(Met-Leu(lle));紅外光譜結(jié)構(gòu)表征

8、顯示高F值玉米寡肽與硒離子螯合機(jī)制為:與硒離子發(fā)生螯合的位置可能是-NH-C=O上的-NH，-COOH上的-OH和末端-NH2。由此可推斷高F值玉米寡肽與硒發(fā)生了螯合并產(chǎn)生了一種新型的螯合物。⑸自制缺硒飼料飼喂小鼠并成功構(gòu)建缺硒模型。缺硒可使小鼠食欲降低，皮毛雜亂，抑制其生長發(fā)育，同時肝臟硒和血清硒含量均降低。經(jīng)過20 d補(bǔ)硒后，飲食恢復(fù)正常，皮毛雜亂現(xiàn)象得到改善。補(bǔ)硒劑量相同的情況下，高F值玉米寡肽-硒螯合物組飼料的生物利用度最高，其

9、次是蛋氨酸硒組，生物利用度最低的是亞硒酸鈉組。高F值玉米寡肽-硒螯合物可以顯著性提高小鼠肝臟硒和血清硒含量，這說明高F值玉米寡肽-硒螯合物是一種良好的補(bǔ)硒劑。與缺硒組相比，高F值玉米寡肽-硒螯合物組顯著降低MDA含量，顯著提高總抗氧化能力，顯著增強(qiáng)SOD活力，這說明高F值玉米寡肽-硒螯合物具有明顯的抗氧化活性，是一種良好的抗氧化劑。與對照組相比，高F值玉米寡肽-硒螯合物組顯著縮短小鼠的醒酒時間，顯著降低ALT和AST活性，說明高F值玉米