雙順反子基因轉(zhuǎn)移體的構(gòu)建及MAR對(duì)基因整合與表達(dá)的影響.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、隨著轉(zhuǎn)基因技術(shù)的不斷發(fā)展，轉(zhuǎn)基因動(dòng)物的安全性受到越來越多的關(guān)注，因此構(gòu)建安全高效的表達(dá)載體是必要的。本實(shí)驗(yàn)通過構(gòu)建質(zhì)粒載體pCAG-FSTN-IRES-AcGFP1-polyA，制備了無質(zhì)粒骨架序列、無抗性標(biāo)記的雙順反子基因轉(zhuǎn)移體CAG-FSTN-IRES-AcGFP1-polyA，以及兩端帶有核基質(zhì)結(jié)合序列(matrix attachment regions,MAR)的雙順反子基因轉(zhuǎn)移體MAR-CAG-FSTN-IRES-AcGFP1

2、-polyA-MAR，并對(duì)這三種載體的轉(zhuǎn)染、整合與表達(dá)功能進(jìn)行了比較分析。結(jié)果表明，無載體骨架序列的雙順反子基因轉(zhuǎn)移體仍能正常的行使基因轉(zhuǎn)移、整合、表達(dá)等功能;在整合效率的比較中，帶有MAR序列的雙順反子基因轉(zhuǎn)移體明顯好于其它兩組;而且，帶有MAR序列的雙順反子基因轉(zhuǎn)移體的表達(dá)水平也明顯優(yōu)于其它兩組。
　　另外，我們還進(jìn)行了這三種載體轉(zhuǎn)基因單克隆細(xì)胞的篩選工作，最終獲得了8株穩(wěn)定建系的MAR雙順反子基因轉(zhuǎn)移體的單克隆細(xì)胞，并對(duì)這些

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