DEV基因文庫(kù)構(gòu)建、核衣殼蛋白基因的發(fā)現(xiàn)及克隆與表達(dá).pdf

1、本研究以DEVCHv株為基本材料，對(duì)該毒株進(jìn)行了提純研究和基因組酶切分析；構(gòu)建了DEV基因文庫(kù)，經(jīng)比對(duì)發(fā)現(xiàn)并克隆、鑒定了其核衣殼蛋白基因；利用該基因片段設(shè)計(jì)引物，建立了基于DEV核衣殼蛋白基因的一種PCR檢測(cè)方法；同時(shí)將該基因克隆到原核表達(dá)載體pET32a中，對(duì)其進(jìn)行了表達(dá)及其表達(dá)產(chǎn)物抗原性的研究。主要內(nèi)容包括：　　1.比較了四種方法對(duì)DEVChv株的提純效果，并對(duì)病毒結(jié)構(gòu)蛋白進(jìn)行了初步分析?！　?.對(duì)DEVCHv株基因組DNA進(jìn)行

2、了限制性核酸內(nèi)切酶分析：通過(guò)DEF增殖DEVCHv株后，比較了兩種方法對(duì)DEV基因組DNA的提取效果。　　3.構(gòu)建了DEV基因文庫(kù)，發(fā)現(xiàn)了DEV核衣殼蛋白基因并進(jìn)行了克隆與鑒定。　　4.利用針對(duì)DEV核衣殼蛋白基因的一對(duì)引物(擴(kuò)增跨度為1013bp,含完整的DEV衣殼蛋白基因)對(duì)DEV強(qiáng)毒CHv株和弱毒CHa株基因組DNA進(jìn)行擴(kuò)增，獲得了與預(yù)期大小相符合的特異性條帶，成功建立了檢測(cè)DEV衣殼蛋白基因的PCR方法?！　?.成功構(gòu)建了