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1、MSTN(肌抑素,myostatin),也稱生長(zhǎng)分化因子8,屬于TGF-β超家族,是骨骼肌生長(zhǎng)和發(fā)育的負(fù)調(diào)控因子,會(huì)抑制骨骼肌的生長(zhǎng)和發(fā)育。卵泡抑素(follistatin,F(xiàn)STN)又稱為FSH抑制蛋白,是單鏈糖蛋白。FSTN蛋白可以與MSTN黏合在一起,阻斷MSTN的抑制功能,從而促進(jìn)肌肉生長(zhǎng)。敲除或敲減MSTN或過(guò)表達(dá)FSTN可以促進(jìn)肌肉發(fā)育,有效增加肌肉量。本研究首先構(gòu)建和篩選出MSTN的高效RNAi干擾載體;然后在篩選出的最佳
2、干擾載體的上游插入核基質(zhì)結(jié)合序列(MAR),構(gòu)建成含有MAR的干擾載體。通過(guò)mRNA和蛋白水平的驗(yàn)證,證實(shí)MAR干擾載體顯著提高了干擾效率。當(dāng)將含MAR的干擾載體轉(zhuǎn)染到肌肉衛(wèi)星細(xì)胞后,與肌肉發(fā)育相關(guān)的基因在敲減的細(xì)胞中的表達(dá)量顯著提高。最后,將外源FSTN基因?qū)隡AR干擾載體,構(gòu)建成沒(méi)有選擇標(biāo)志和載體骨架序列、安全的獨(dú)立基因轉(zhuǎn)移體,即pMAR-U6-shRNA926-CMV-FSTN。該基因轉(zhuǎn)移體可長(zhǎng)期穩(wěn)定降低MSTN基因的表達(dá)并增強(qiáng)
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