Survivin基因siRNA表達質(zhì)粒的構(gòu)建及對其轉(zhuǎn)染的膠質(zhì)瘤細胞的影響.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、背景：Survivin特異地在腫瘤組織中過表達，尤其在膠質(zhì)瘤中高表達。許多報道表明抑制它的功能對腫瘤治療有利。RNA干擾被證明是一項能有效而特異地抑制基因表達的新技術(shù)，目前已成為腫瘤基因治療研究的熱點。 目的：利用RNA干擾(RNAi)技術(shù)，以survivin為靶基因，設計構(gòu)建siRNA表達質(zhì)粒，進行測序鑒定，并檢測該表達質(zhì)粒對膠質(zhì)瘤細胞survivin基因表達的影響，為進一步研究survivin基因在膠質(zhì)瘤發(fā)生發(fā)展中的作用以及

2、以survivin為靶點的膠質(zhì)瘤的治療奠定基礎。 方法：1.設計具有短發(fā)夾結(jié)構(gòu)的兩條DNA序列，經(jīng)退火成互補雙鏈，再克隆至載體pSilencer3.1-H1-hygro中構(gòu)建重組質(zhì)粒，轉(zhuǎn)化DH5α菌株，經(jīng)菌落PCR鑒定后，提取質(zhì)粒行酶切鑒定，并進行序列測定。 2.利用構(gòu)建成功的siRNA表達質(zhì)粒，通過脂質(zhì)體介導轉(zhuǎn)染膠質(zhì)瘤細胞株U87細胞，并通過RT-PCR、Westernblot檢測細胞中survivinmRNA和蛋白的

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