補(bǔ)腎安胎方對(duì)胚胎著床障礙的改善作用.pdf

1、目的：
　　 1.觀察補(bǔ)腎安胎方對(duì)吲哚美辛誘導(dǎo)著床障礙小鼠妊娠率和著床位點(diǎn)數(shù)的影響并探討其作用機(jī)制；
　　 2.觀察補(bǔ)腎安胎方對(duì)胚泡著床障礙小鼠白血病抑制因子（LIF）表達(dá)的影響；
　　 3 觀察中藥補(bǔ)腎安胎方對(duì)胚泡著床障礙模型小鼠類肝素結(jié)合因子（HB-EGF）及其受體(EGFR)表達(dá)的影響。
　　 方法：
　　 第一部分：建立消炎痛誘導(dǎo)胚泡著床障礙小鼠模型及觀察補(bǔ)腎安胎方對(duì)模型小鼠孕卵著床的影響

2、。
　　 將妊娠小鼠隨機(jī)分為正常組，吲哚美辛組（模型組），補(bǔ)腎安胎方組（中藥組）正常組于妊娠第3、4天每天二次皮下分別注射溶劑，模型組和中藥組均于妊娠第3、4天每天二次皮下分別注射吲哚美辛（4.33mg/kg）造成小鼠胚泡著床障礙的動(dòng)物模型。妊娠第5、8天觀察比較3組小鼠妊娠率、妊娠小鼠著床點(diǎn)數(shù)。在光學(xué)顯微鏡下觀察妊娠第5天（Pd5）、第6天（Pd6）、第8天（Pd8）子宮內(nèi)膜形態(tài)結(jié)構(gòu)變化。
　　 第二部分:補(bǔ)腎安胎方調(diào)

3、節(jié)胚泡著床障礙小鼠雌、孕激素的實(shí)驗(yàn)研究。
　　 造模同第一部分。將妊娠雌鼠隨機(jī)分為正常組、模型組、中藥組，各組22只。妊娠第5、8天留取血清，采用放免法檢測(cè)雌、孕激素含量；采用免疫組化技術(shù)檢測(cè)子宮雌、孕激素受體表達(dá)。
　　 第三部分:補(bǔ)腎安胎方對(duì)胚泡著床障礙小鼠白血病抑制因子表達(dá)的影響。
　　 造模同第一部分。將妊娠雌鼠隨機(jī)分為正常組、模型組、中藥組，各組40只。在妊娠第四、五、六天（Pd4、5、6），三組均取妊

4、娠子宮。用RT-PCR和免疫組織化學(xué)法分別測(cè)定LIF的表達(dá)。
　　 第四部:分補(bǔ)腎安胎方對(duì)胚泡著床障礙小鼠胚胎著床局部HB-EGF及其受體的影響造模同第一部分。將妊娠雌鼠隨機(jī)分為正常組、模型組、中藥組，各組30只，在妊娠第五、六天（Pd5、6），三組均取妊娠子宮。運(yùn)用RT-PCR的方法檢測(cè)HB-EGF mRNA的含量，采用免疫組織化學(xué)法測(cè)定HB-EGF及其受體的表達(dá)。
　　 結(jié)果：
　　 第一部分:在Pd5，模型

5、組的對(duì)伊文思藍(lán)反應(yīng)和平均反應(yīng)點(diǎn)數(shù)顯著低于正常組，中藥組與正常組無顯著差異。在Pd8，模型組小鼠妊娠率和胚泡著床位點(diǎn)數(shù)（27.3%、5.3±0.7）顯著低于正常組(90.9%、13.3±2.8)（P<0.01）；中藥組（72.7%、10.7±2.2）較模型組顯著有增高（P<0.05）。中藥組Pd5、Pd6、Pd8子宮內(nèi)膜與模型組比較，內(nèi)膜血管明顯比模型組增加，基質(zhì)蛻膜化有序進(jìn)行，中藥組與正常組無顯著差異。
　　 第二部分: 血清雌

6、激素水平中第5天中藥組高于模型組，第8天中藥組不僅高于模型組，而且也高于正常組；血清孕激素水平中第5天模型組、中藥組均低于正常組，但第8天中藥組雖然低于正常組，但是顯著高于模型組。免疫組織化學(xué)結(jié)果顯示，中藥組雌、孕激素受體表達(dá)顯著多于模型組。
　　 第三部分: Pd4、5、6，模型組小鼠子宮內(nèi)膜LIF表達(dá)在時(shí)空上明顯滯后，補(bǔ)腎安胎方能促進(jìn)胚泡著床障礙小鼠子宮內(nèi)膜LIF及時(shí)有序地表達(dá)。
　　 第四部分: Pd5、6,模型組

7、子宮內(nèi)膜HB-EGF及其受體的表達(dá)在時(shí)間上明顯滯后并且表達(dá)量減少，中藥組與模型組有顯著性差異。
　　 結(jié)論：
　　 1.補(bǔ)腎安胎方能夠改善著床障礙小鼠妊娠率和著床位點(diǎn)數(shù)。
　　 2.補(bǔ)腎安胎方能夠調(diào)節(jié)著床期間血清雌孕激素的含量以及雌孕激素受體在子宮內(nèi)膜上的表達(dá)，誘導(dǎo)白血病抑制因子、類肝素結(jié)合表皮生長(zhǎng)因子及其受體的適時(shí)表達(dá)，有利于著床期間子宮內(nèi)膜蛻膜化并且促進(jìn)子宮內(nèi)膜和胚胎間的對(duì)話；表明：補(bǔ)腎安胎方在胚泡定位、黏附