IL-1、β1，4-GalTⅠ在胚胎著床中的作用及對其它著床相關(guān)因子表達的影響.pdf

1、目的：哺乳動物的胚胎著床是一個極其復(fù)雜的過程。胚泡的成功植入依賴于胚胎與子宮之間恰當(dāng)?shù)南嗷プ饔?。胚胎的發(fā)育起始于受精卵，它是一個單個的全能細胞，經(jīng)過有絲分裂形成多細胞結(jié)構(gòu)，即胚泡。同時，卵巢類固醇激素的增加啟動信號級聯(lián)放大過程，促進子宮內(nèi)膜基質(zhì)細胞蛻膜化，使子宮準(zhǔn)備接受胚胎。各種著床相關(guān)因子的表達隨著床進程發(fā)生變化，促進胚胎與子宮內(nèi)膜的相互識別、黏附。 白細胞介素-1（Interleukin-1，IL-1）由巨噬細胞、間質(zhì)細胞和

2、滋養(yǎng)層細胞產(chǎn)生，是介導(dǎo)胚泡著床最主要的細胞因子之一。IL-1家族包括IL-1α、IL-1β和IL-1受體拮抗劑（IL-1ra），研究表明：IL-1α和IL-1β在子宮內(nèi)膜上皮細胞、間質(zhì)細胞和內(nèi)皮細胞中廣泛存在；受精卵的成功植入與胚胎環(huán)境中高濃度的IL-1α和IL-1β相關(guān)；IL-1Ⅰ型受體（IL-1RⅠ）基因敲除的小鼠生育能力受到損傷。 β1，4-半乳糖基轉(zhuǎn)移酶Ⅰ（β1，4-galactosyltransferaseⅠ，β1，4

3、-GalTⅠ）是糖基轉(zhuǎn)移酶中最早被純化的，也是研究最深入的成員之一，主要定位于大多數(shù)真核細胞的高爾基體，參與糖蛋白和糖脂中寡糖鏈的延伸。β1，4-GaITⅠ還被發(fā)現(xiàn)存在于細胞表面，是細胞外糖苷底物的受體。細胞表面的β1，4-GalTⅠ作為一種黏附分子，參與細胞黏附、鋪展、精卵識別、神經(jīng)軸突生長、組織形成和腫瘤轉(zhuǎn)移，而胚胎著床與腫瘤轉(zhuǎn)移、侵襲過程非常相似。 本文主要以IL-1和β1，4-半乳糖基轉(zhuǎn)移酶Ⅰ作為研究對象，觀察它們在胚胎

4、著床中的作用，及對子宮內(nèi)膜其它著床相關(guān)因子表達的影響，進而探討胚胎著床的調(diào)控機理。 方法：將已構(gòu)建好的β1，4-GalTⅠ基因干擾質(zhì)粒、過表達質(zhì)粒、干擾對照質(zhì)粒和空載體質(zhì)粒分別轉(zhuǎn)染RL95-2細胞（模擬著床期子宮內(nèi)膜細胞）后，采用免疫印跡（Dot-blot）、RT-PCR等技術(shù)分析各組轉(zhuǎn)染細胞中β1，4-GalTⅠ對IL-1β和MMP-9表達的影響；將著床相關(guān)因子IL-1β及其受體拮抗劑IL-1ra分別與RL95-2細胞共培養(yǎng)，

5、檢測11-1β對β1，4-GalTⅠ、MMP-9和COX-2表達的調(diào)控；通過由RL95-2細胞（模擬著床期子宮內(nèi)膜）和JAR細胞（模擬著床期胚胎）組成的體外著床模型，觀察β1，4-GalTⅠ對胚胎黏附率的影響。 結(jié)果：質(zhì)粒轉(zhuǎn)入RL95-2細胞60h后，細胞內(nèi)有明顯的綠色熒光蛋白表達；RT-PCR結(jié)果顯示：與正常培養(yǎng)組、空載體組和干擾對照組相比，β1，4-GalTⅠ的基因表達明顯降低；過表達組βl，4-GalTⅠ基因表增高，說明質(zhì)

6、粒轉(zhuǎn)染效果良好。同時觀察到，抑制βl，4-GalTⅠ的基因表達，MMP-9基因表達和蛋白合成降低，JAR細胞的黏附率（36．2%）低于正常培養(yǎng)組（72．1%）、空載體組（70．6%）和干擾對照組（68．7%）；過表達βl，4-GalTⅠ，MMP-9基因表達和蛋白合成增高，JAR細胞的黏附率（83．9%）也明顯增高。但是調(diào)控，βl，4-GalTⅠ基因的表達，對IL-1β的表達無明顯影響。 RL95-2細胞經(jīng)與IL-1β共培養(yǎng)24