牛乳過敏原酶聯(lián)免疫分析方法的建立.pdf

1、牛乳中酪蛋白，β-乳球蛋白和α-乳白蛋白是重要的食品過敏原，尤其在嬰幼兒中引起過敏反應(yīng)。本論文制備了牛乳全蛋白，并通過免疫動(dòng)物制備了特異性識(shí)別牛乳蛋白的多克隆抗體，優(yōu)化建立了牛乳過敏原蛋白間接競(jìng)爭(zhēng)免疫分析方法，并用于實(shí)際樣品的檢測(cè)。
　　分別以牛乳全蛋白，β-乳球蛋白為免疫原免疫動(dòng)物制備了兔多克隆抗體、鼠抗多克隆抗體。通過對(duì)包被量，抗體稀釋倍數(shù)，蛋白稀釋液pH等檢測(cè)條件的優(yōu)化，針對(duì)牛乳全蛋白和β-乳球蛋白分別建立了間接競(jìng)爭(zhēng)酶聯(lián)免疫

2、檢測(cè)方法。
　　β-乳球蛋白間接競(jìng)爭(zhēng)酶聯(lián)免疫檢測(cè)方法的工作條件為:包被蛋白0.05μg/well，封閉液為1％ BSA/PBS，抗體稀釋倍數(shù)為1∶10000，蛋白稀釋液為pH8.5的PBS，IC50為3.08±0.24μg/mL。交叉實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，β-乳球蛋白抗體與酪蛋白交叉反應(yīng)率為1.59％，與其余幾種常見食物過敏原蛋白無交叉反應(yīng)。
　　牛乳全蛋白間接競(jìng)爭(zhēng)ELISA方法檢測(cè)全蛋白的工作條件為:包被量為0.05μg/well

3、，封閉液為1％ BSA/PBS，抗體稀釋倍數(shù)為1∶100000，蛋白稀釋液為pH8.5的PBS，IC50為3.19±0.17μg/mL，同時(shí)該方法可有效檢測(cè)酪蛋白、β-乳球蛋白、α-乳白蛋白，IC50分別是:酪蛋白3.52±0.46μg/mL，β-乳球蛋白3.91±0.84μg/mL，α-乳白蛋白16.27±0.06μg/mL。交叉試驗(yàn)表明該方法與大豆、芝麻、花生、雞蛋等幾種常見過敏原蛋白無交叉反應(yīng)，顯示了較好的特異性。板內(nèi)變異系數(shù)為0

4、.25％～8.53％，板間變異系數(shù)為0.75％～11.72％，證明該方法具有良好的重現(xiàn)性。
　　將牛乳全蛋白間接競(jìng)爭(zhēng)ELISA方法用于檢測(cè)白面包，添加回收率為81.79％～95.96％，板內(nèi)和板間變異系數(shù)分別為6.41％～8.93％，0.18～6.70％。餅干的添加回收率為81.17％～89.30％，板內(nèi)和板間變異系數(shù)分別為1.82％～3.52％，3.02～14.11％。說明所建立方法檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確，能有效用于食品中牛乳蛋白含量的準(zhǔn)