杏仁過(guò)敏原ELISA方法的建立及加工方式對(duì)致敏性的影響.pdf

1、杏仁屬樹(shù)類(lèi)堅(jiān)果，其過(guò)敏原蛋白amandin是重要的食品過(guò)敏原之一，能引起IgE介導(dǎo)的Ⅰ型過(guò)敏反應(yīng)。
　　本論文提取了國(guó)產(chǎn)苦杏仁、甜杏仁的過(guò)敏原蛋白amandin，免疫動(dòng)物制備了兔抗、鼠抗多克隆抗體，分別針對(duì)苦杏仁和甜杏仁中amandin建立了雙抗體夾心酶聯(lián)免疫檢測(cè)方法，檢測(cè)限分別為10.16±1.27ng/mL(苦杏仁amandin)和6.36±1.02ng/mL(甜杏仁amandin)。兩種夾心ELISA檢測(cè)方法與14種常見(jiàn)食物

2、蛋白沒(méi)有任何交叉反應(yīng)，顯示了方法良好的特異性。利用兩種檢測(cè)方法分別檢測(cè)苦杏仁、甜杏仁和美國(guó)杏仁中的amandin，其中甜杏仁雙抗體夾心ELISA法能分別檢測(cè)低至12.11±1.70ng/mL的苦杏仁amandin和18.9±1.52ng/mL的美國(guó)杏仁amandin。將該方法用于法式小面包、餅干和脫脂牛奶中杏仁過(guò)敏原的檢測(cè)，amandin的添加回收率為78.94％～125.15％，且通過(guò)板間、板內(nèi)變異實(shí)驗(yàn)得出夾心ELISA法均具有良好的

3、重現(xiàn)性。
　　論文進(jìn)一步研究了干熱(100℃，200℃，250℃，400℃)、濕熱(60℃，100℃)、高溫滅菌以及超高壓(400MPa，500MPa，580MPa)處理對(duì)amandin性質(zhì)的影響。以回收率評(píng)價(jià)amandin溶解性，SDS-PAGE、拉曼散射光譜分析蛋白結(jié)構(gòu)，采用amandin間接競(jìng)爭(zhēng)ELISA方法評(píng)價(jià)amandin的免疫反應(yīng)性。結(jié)果顯示，在干熱處理時(shí)amandin呈現(xiàn)一定的穩(wěn)定性，而濕熱處理時(shí)，水分協(xié)同溫度與高壓