鮸魚補體基因家族成員分子結構及表達分析.pdf

1、魚類作為出現(xiàn)最早的較為低等的脊椎動物，已經進化出了與高等脊椎動物相似的適應性免疫反應。雖然適應性免疫反應在魚類中應答效率較低，但是他們似乎能夠充分利用發(fā)達的先天免疫系統(tǒng)來彌補它們在抗體反應中的不足。補體系統(tǒng)作為先天性免疫的一種，在魚類抵抗外來微生物入侵中發(fā)揮著極為重要的作用。本研究中我們利用本地blast選用近緣物種的基因作為目標序列去搜索鮸魚轉錄組和基因組數(shù)據(jù)庫從而得到9種鮸魚補體基因，包括補體基因Bf/C2、C4、C5、C6、C7-

2、1、C7-2、C8α、C8β和C8γ的序列全長，然后對基因在正常情況和感染后的表達進行了研究，最后結合其他物種的這九種基因進行基因結構和線性分析。
　　對補體Bf/C2進行的生物信息學研究表明，鮸魚補體Bf/C2序列全長為2,301bp，編碼766個氨基酸，包含19個外顯子和18個內含子，與其他魚類具有相似的基因結構。基因線性分析表明，魚類補體Bf/C2具有相對較高的保守性。熒光定量PCR實驗結果顯示，補體Bf/C2雖然在鮸魚未感

3、染組織中均有表達，但是不同的組織表達具有差異性。而在感染鰻弧菌的組織中，補體Bf/C2在肝臟和腎臟中的表達是上調的，在脾臟中的表達是受抑制的。
　　從鮸魚基因組中得到了補體 C4和 C5的基因序列，與其他魚類相比補體 C4和C5基因結構和基因線性在進化上分別具有相對較高的保守性。補體C4的熒光定量實驗結果顯示，補體C4同樣在鮸魚未感染組織中均有表達但是在不同組織中的表達量不同。而在感染后的組織中，補體 C4在肝臟中的表達是上調的，

4、而在腎臟和脾臟中的表達是受到抑制的。
　　對末端補體成分(terminal complement component, TCC)的研究發(fā)現(xiàn)，由于魚類經歷了一次特殊的基因組復制導致補體 C7發(fā)生了復制。盡管基因復制在硬骨魚類的補體成分中是很常見的進化模式，但是有關 TCC成員基因復制的研究報道很少。生物信息學分析表明，魚類補體C7-1和C7-2在基因結構和基因線性上分別具有相對較高的保守性，除了補體C9外其他幾種末端補體成分同樣具有

5、相對保守的基因線性。熒光定量結果顯示補體C7-1和C7-2基因在鮸魚十個健康組織中都有所表達，但是不同組中的表達量不同。其中補體 C7-1基因在肝臟、脾臟和腦中的表達量很高，在鰓、肌肉、眼睛、心臟和腎臟中的表達量相對較低。補體 C7-2基因在肝臟、脾臟和腎臟中的表達量相對較高，而在眼睛、鰓、腦、肌肉、心臟和腸中的表達量相對較低。在感染后的組織中，補體C7-1和C7-2基因在同一組組織中的表達反應時間也是不同的。這些結果都證明補體C7-1