氣單胞菌屬來源的新型普魯蘭酶的鑒定及其編碼基因的克隆與表達(dá).pdf

1、普魯蘭降解酶(pullulan degrading enzymes)廣泛存在于動物、植物和微生物中，它能夠?qū)Ｒ凰馄蒸斕m多糖α-1，6糖苷鍵或特定位置的α-1，4糖苷鍵。普魯蘭降解酶在工業(yè)、洗滌去污業(yè)、醫(yī)療保健等行業(yè)中應(yīng)用十分廣泛，具有重要的應(yīng)用意義。本研究以稻田、菜地土壤及污泥為采集樣品，采用唯一碳源法篩選到1株產(chǎn)普魯蘭降解酶的菌株3G2，在可溶性淀粉為底物誘導(dǎo)條件下表達(dá)，搖瓶發(fā)酵產(chǎn)普魯蘭酶的水平達(dá)到24.8 U/mL。通過對該菌株的

2、形態(tài)觀察及16S rDNA分析鑒定3G2菌株來源于細(xì)菌中的氣單胞菌屬(Aeromonas sp.3G2)，本研究首次通過實驗的方法篩選到氣單胞菌屬來源的產(chǎn)普魯蘭酶菌株。通過設(shè)計保守引物，PCR方法獲得Aeromonas sp.3G2普魯蘭酶基因pluAs，全長4053 bp，鑒定為新的普魯蘭酶基因。該基因編碼1351個氨基酸，蛋白具有4個保守結(jié)構(gòu)域(PUD、CBM48、GH13、DUF)。本研究通過PCR的方法擴(kuò)增了pluAs基因不同的

3、區(qū)段，分別是:PluAs蛋白的四個核心結(jié)構(gòu)域（22～1114位氨基酸，PluAs-1），去除PUD結(jié)構(gòu)域的基因片段（149～1344位氨基酸，PluAs-2），革蘭氏陰性菌普魯蘭酶的保守結(jié)構(gòu)域（149～1114位氨基酸，PluAs-3），GH13核心催化結(jié)構(gòu)域(538～935位氨基酸，PluAs-4)。利用大腸桿菌表達(dá)體系重組表達(dá)并獲得了多種具有活性的普魯蘭酶片段（PluAs-1、PluAs-2、PluAs-3）。重組表達(dá)的普魯蘭酶最適