基于SPM-ELP融合標簽的抗葡萄球菌嵌合蛋白P128的表達、純化及抗菌活性.pdf

1、抗菌肽(Antibacterial peptide，ABP)是存在于生物體內(nèi)的一類具有抗菌活性的小分子多肽，不但具有抗菌、抗腫瘤或抗病毒活性，而且不容易產(chǎn)生耐藥性，已經(jīng)成為新藥開發(fā)研究的熱點。其中，P128是由葡萄球菌噬菌體K細胞壁降解酶活性區(qū)(lys16)與溶葡萄球菌素細胞壁結(jié)合區(qū)(SH3b)組成的一種雜合肽，既保持了lys16和SH3b的抗菌活性，又不具有溶血性等細胞毒性。P128雜合肽已在重組大腸桿菌獲得成功表達，但其分離純化復(fù)雜

2、、生產(chǎn)成本較高。
　　類彈性蛋白多肽(Elastin-like polypeptide，ELP)是一種具有溫度敏感相變特性的五肽聚合物，在低于相變溫度的溶液中呈可溶狀態(tài)，而在高于相變溫度的溶液中為凝聚狀態(tài)。ELP融合蛋白仍具有ELP的溫度敏感相變特性，因此可通過溫度控制和離心法將其與菌體蛋白分離。腦膜炎奈瑟氏菌FrpC蛋白的自加工元件(self-processing module，SPM)在鈣離子誘導(dǎo)下能發(fā)生自我切割，從而能從前體

3、蛋白釋放，因此可用作融合蛋白的自裂解標簽。因此，利用SPM-ELP融合標簽有望建立簡單、經(jīng)濟、規(guī)模化重組蛋白或抗菌肽制備技術(shù)。
　　本研究將P128編碼序列優(yōu)化成大腸桿菌密碼子偏愛序列，將化學(xué)合成的P128編碼序列插入SPM-ELP融合表達載體，用IPTG誘導(dǎo)P128-SPM-ELP融合蛋白表達。SDS-PAGE分析結(jié)果顯示，在37℃條件下融合蛋白不僅能有效表達，而且表達產(chǎn)物為可溶性蛋白。通過對相變溫度、氯化鈉濃度和離心力等相變循