懸浮力學(xué)狀態(tài)通過(guò)誘導(dǎo)整合素β1表達(dá)上調(diào)促進(jìn)乳腺腫瘤細(xì)胞的外滲.pdf

1、腫瘤轉(zhuǎn)移是惡性腫瘤的重要生物學(xué)特征，大多數(shù)腫瘤患者并非死于原發(fā)性癌而是死于轉(zhuǎn)移性癌。近年來(lái)，針對(duì)循環(huán)腫瘤細(xì)胞(circulating tumor cells,CTCs)外滲機(jī)制的研究已成為抑制腫瘤轉(zhuǎn)移的新熱點(diǎn)。本課題采用懸浮培養(yǎng)的方法模擬CTCs在血液循環(huán)系統(tǒng)中的懸浮力學(xué)狀態(tài)，探討懸浮力學(xué)狀態(tài)對(duì)乳腺腫瘤細(xì)胞與內(nèi)皮細(xì)胞之間相互作用的影響，重點(diǎn)考察了細(xì)胞粘附分子(cell adhesion molecules,CAMs)整合素β1(inte

2、grinβ1)在該過(guò)程中所扮演的角色。主要研究工作和實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下：
　　①懸浮培養(yǎng)促進(jìn)乳腺腫瘤細(xì)胞的外滲
　　通過(guò)流動(dòng)腔粘附實(shí)驗(yàn)和Transwell細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn)檢測(cè)貼壁組和懸浮組MDA-MB-231乳腺腫瘤細(xì)胞在內(nèi)皮細(xì)胞層的粘附能力、鋪展能力及跨內(nèi)皮遷移能力。流動(dòng)腔粘附實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：經(jīng)懸浮培養(yǎng)1天或3天的MDA-MB-231細(xì)胞，其在內(nèi)皮細(xì)胞層的粘附能力顯著強(qiáng)于貼壁組(P<0.05)，懸浮培養(yǎng)1天和3天之間無(wú)顯著性差異。利用

3、軟件ImageJ對(duì)乳腺腫瘤細(xì)胞的鋪展形態(tài)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，結(jié)果表明：在相同共孵育時(shí)間下，懸浮組MDA-MB-231細(xì)胞在內(nèi)皮細(xì)胞層的鋪展面積顯著大于貼壁組(P<0.01)；共孵育6小時(shí)，懸浮組MDA-MB-231細(xì)胞圓度顯著小于貼壁組。Transwell細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：懸浮組MDA-MB-231細(xì)胞發(fā)生跨內(nèi)皮遷移的細(xì)胞數(shù)量顯著多于貼壁組(P<0.01)。
　?、趹腋×W(xué)狀態(tài)誘導(dǎo)整合素β1高表達(dá)
　　通過(guò)qPCR和免疫印跡法

4、檢測(cè)貼壁組和懸浮組MDA-MB-231細(xì)胞整合素β1的表達(dá)水平。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明懸浮培養(yǎng)使得整合素β1在基因水平的表達(dá)量提高了2.35±0.58倍(P<0.05)，在蛋白水平的表達(dá)量提高了2.17±0.40倍(P<0.01)。通過(guò)siRNA技術(shù)對(duì)整合素β1進(jìn)行敲低處理，qPCR結(jié)果表明：貼壁組MDA-MB-231細(xì)胞的整合素β1在基因水平上降低了62％(貼壁對(duì)照組化1處理，P<0.01)，敲低效果極顯著；懸浮組MDA-MB-231細(xì)胞的整合

5、素β1在基因水平上降低了74%(P<0.01)，敲低效果極顯著。
　　免疫印跡法結(jié)果表明：整合素β1敲低處理后，貼壁組MDA-MB-231細(xì)胞的整合素β1在蛋達(dá)水平上降低了39%(貼壁對(duì)照組化1處理，P<0.01)，敲低效果極顯著；懸浮組MDA-MB-231細(xì)胞的整合素β1在蛋白水平上降低了80%(P<0.01)，敲低效果極顯著。
　?、壅纤卅?對(duì)乳腺腫瘤細(xì)胞外滲的影響
　　設(shè)置貼壁對(duì)照組(Ad-Ctrl)、貼壁整合

6、素β1敲低組(Ad-ITGB1)、懸浮對(duì)照組(Susp-Ctrl)、懸浮整合素β1敲低組(Susp-ITGB1)，通過(guò)流動(dòng)腔粘附實(shí)驗(yàn)、鋪展實(shí)驗(yàn)和Transwell細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn)檢測(cè)整合素β1對(duì)MDA-MB-231細(xì)胞外滲能力的影響。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：整合素β1敲低組MDA-MB-231細(xì)胞(si-ITGB1)與陰性對(duì)照組(si-Ctrl)相比，在內(nèi)皮細(xì)胞層的粘附數(shù)量顯著降低；si-ITGB1組和si-Ctrl組MDA-MB-231在內(nèi)皮細(xì)胞層