基于SIRT1信號通路探討中藥復(fù)方發(fā)酵液“栓通靈”對大鼠腦缺血再灌注損傷的防治作用及機(jī)制.pdf

1、目的：本課題組在分析總結(jié)前人防治缺血性腦卒中用藥的基礎(chǔ)上，再加以臨床診療過程中的經(jīng)驗及理解，組成了具有特色的新方發(fā)酵液—“栓通靈”（STL）。本課題擬采用線栓法建立右側(cè)大鼠腦缺血再灌注（I/R）模型，并試圖從抗炎和抗凋亡角度探討SIRT1信號通路在中藥復(fù)方發(fā)酵液“栓通靈”防治腦缺血再灌注損傷的可能作用機(jī)制。
　　方法：
　　(1)中藥復(fù)方發(fā)酵液“栓通靈”制備：葛根、丹參、姜黃、白芥子、山楂、石見穿、白術(shù)、柴胡、菊花、天麻、白

2、芍、竹節(jié)參、黃芪、香附14味中藥材按比例稱取，切片，將藥材總重量與水按1:10的水量浸泡藥材30 min后，100℃煎煮60 min，煎煮液由10倍水量濃縮至5倍水量即可用于發(fā)酵。發(fā)酵微生物為：酵母菌、醋酸桿菌、乳酸桿菌以1:1:1的配比后加入煎煮液中，于37℃發(fā)酵2天，過濾得到發(fā)酵藥液，最后經(jīng)巴氏消毒灌裝。
　　(2)高效液相色譜法檢測“栓通靈”中所含的主要藥物成分：在同一色譜條件和進(jìn)樣量下，分別測定“栓通靈”中葛根素、芍藥苷、

3、丹酚酸B、竹節(jié)參皂苷V、黃芪甲苷IV、姜黃素以及已知的葛根素、芍藥苷、丹酚酸B、竹節(jié)參皂苷V、黃芪甲苷IV、姜黃素標(biāo)準(zhǔn)品的保留時間，并將其色譜峰、保留時間與對應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行比較，兩者基本相同，從而確定混合樣品中是否含有以上6種物質(zhì)。
　　(3)將40只體重為250-280 g的 specific pathogen free（SPF）級Sprague-Daewley（SD）大鼠隨機(jī)分為5組：假手術(shù)組、模型組、“栓通靈”低劑量組、“栓

4、通靈”高劑量組和“栓通靈”+EX527組?！八ㄍ`”低劑量組的大鼠按5.7 mL/kg劑量灌胃法給予“栓通靈”，“栓通靈”高劑量組與“栓通靈”+EX527組的大鼠按17.2 mL/kg劑量灌胃法給予“栓通靈”，“栓通靈”+EX527組的大鼠每兩天腹腔注射5 mg/kg劑量的EX527（SIRT1抑制劑），假手術(shù)組和模型組的大鼠灌胃法給予等量的生理鹽水。預(yù)給藥7d后，應(yīng)用線栓法建造大鼠右側(cè)大腦中動脈閉塞90 min，再灌注24 h的模型。

5、
　　(4)各組于再灌注24 h的時間點(diǎn)觀察大鼠的行為動作，同時進(jìn)行神經(jīng)功能損傷評分。
　　(5) TTC染色法檢測缺血再灌注24 h后大鼠腦梗死面積。
　　(6) ELISA法檢測缺血再灌注24 h后大鼠缺血半側(cè)腦組織中IL-1β和TNF-α的含量。
　　(7) Western Blotting法檢測缺血再灌注24 h后大鼠缺血半側(cè)腦組織SIRT1、Ac-p53、Bcl-2及Bax蛋白的表達(dá)。
　　結(jié)果：

6、
　　(1)中藥復(fù)方發(fā)酵液“栓通靈”中含有葛根素、芍藥苷、丹酚酸B、竹節(jié)參皂苷V、黃芪甲苷IV、姜黃素6種主要成分。
　　(2)模型組大鼠的神經(jīng)功能損傷評分較假手術(shù)組明顯升高，“栓通靈”低劑量組和“栓通靈”高劑量組大鼠的神經(jīng)功能損傷評分較模型組顯著降低，“栓通靈”+EX527組大鼠神經(jīng)功能損傷評分顯著高于“栓通靈”高劑量組。
　　(3)模型組大鼠的腦梗死面積較假手術(shù)組明顯增大，“栓通靈”低劑量組和“栓通靈”高劑量組大鼠

7、的腦梗死面積較模型組顯著降低，“栓通靈”+EX527組大鼠腦梗死面積顯著高于“栓通靈”高劑量組。
　　(4)模型組大鼠缺血側(cè)腦組織中的TNF-α和IL-1β的含量較假手術(shù)組明顯升高，“栓通靈”低劑量組和“栓通靈”高劑量組大鼠的缺血側(cè)腦組織中的炎癥因子TNF-α和IL-1β的含量較模型組顯著降低，“栓通靈”+EX527組大鼠缺血側(cè)腦組織中的炎癥因子TNF-α和IL-1β的含量顯著高于“栓通靈”高劑量組。
　　(5)模型組大鼠缺

8、血側(cè)腦組織中的SIRT1、Bcl-2蛋白的表達(dá)量較假手術(shù)組明顯降低，“栓通靈”低劑量組和“栓通靈”高劑量組大鼠的缺血側(cè)腦組織中的SIRT1、Bcl-2蛋白的表達(dá)量較模型組顯著增高，“栓通靈”+EX527組大鼠缺血側(cè)腦組織中SIRT1、Bcl-2蛋白的表達(dá)量顯著低于“栓通靈”高劑量組；模型組大鼠缺血側(cè)腦組織中的Ac-p53、Bax蛋白的表達(dá)量較假手術(shù)組明顯增高，“栓通靈”低劑量組和“栓通靈”高劑量組大鼠的缺血側(cè)腦組織中的Ac-p53、Ba

9、x蛋白的表達(dá)量較模型組顯著降低，“栓通靈”+EX527組大鼠缺血側(cè)腦組織中Ac-p53、Bax蛋白的表達(dá)量顯著高于“栓通靈”高劑量組。
　　結(jié)論：
　　(1)中藥復(fù)方發(fā)酵液“栓通靈”可減輕腦缺血再灌注模型大鼠的神經(jīng)功能損傷，減少腦梗死面積，進(jìn)而發(fā)揮對腦組織的保護(hù)作用；
　　(2)中藥復(fù)方發(fā)酵液“栓通靈”可降低腦缺血再灌注模型大鼠缺血腦組織中TNF-α和IL-1β的含量，減輕大鼠腦缺血再灌注炎癥損傷；
　　(3)中