黃體酮納米晶注射液的制備及體內(nèi)外評價.pdf

1、目的：
　　本研究將難溶性藥物黃體酮制備成黃體酮納米晶注射液，以提高黃體酮的飽和溶解度、釋放速率和藥效，提高黃體酮的相對生物利用度同時減小刺激性，降低毒副作用。本課題制備了黃體酮納米晶注射液并表征其形貌、粒徑和晶型穩(wěn)定性，進行體外納米效應評價、安全性評價和藥代動力學研究，并與市售制劑黃體酮注射液進行對比，擬在評價黃體酮納米晶注射液用于預防早產(chǎn)，孕婦保胎的優(yōu)勢及可行性。
　　內(nèi)容：
　　進行黃體酮納米晶體的處方工藝研究，

2、篩選合適的研磨儀器、轉(zhuǎn)速及時間，以黃體酮納米晶體的粒徑、電位、多分散系數(shù)等作為主要的評價指標，確定該注射液的最優(yōu)處方組成、最佳工藝條件；通過透射電鏡、激光粒度儀、差示掃描量熱法、X射線粉末衍射法和傅氏轉(zhuǎn)換紅外線光譜法分析，確定黃體酮納米晶體的形貌、粒徑，電位、結構和晶型穩(wěn)定性等微觀特征；建立了黃體酮高效液相色譜的含量測定方法，評價黃體酮納米晶注射液在提高藥物的飽和溶解度和釋放速度等方面的納米效應；通過在大鼠體內(nèi)肌肉注射黃體酮納米晶注射液

3、和市售黃體酮注射液，分別對這兩種制劑進行了藥代動力學研究，評價它們的藥代動力學特征；通過溶血試驗和家兔肌肉局部刺激性實驗評價了黃體酮納米晶注射液的安全性。
　　方法：
　　采用介質(zhì)研磨法制備黃體酮納米晶注射液，以粒徑、多分散系數(shù)、Zeta電位和放置穩(wěn)定性為指標，通過單一穩(wěn)定劑和復合穩(wěn)定劑種類及用量的篩選，優(yōu)化關鍵工藝參數(shù)，確定了黃體酮納米晶注射液的最優(yōu)處方和研磨工藝。
　　通過透射電鏡測量了黃體酮納米晶體的形貌和大小，

4、將黃體酮納米晶注射液凍干成粉末，通過 X射線粉末衍射對其晶型結構進行了分析，通過差示掃描量熱法對其相變溫度進行了考察，傅氏轉(zhuǎn)換紅外線光譜法對其化學結構進行了分析，并與黃體酮原料藥進行相應的對比，考察分析黃體酮經(jīng)過濕磨機研磨后，晶型的穩(wěn)定性。
　　建立黃體酮HPLC含量測定分析方法，通過透析袋和搖床法對黃體酮納米晶注射液和黃體酮原料藥的體外釋放速率和飽和溶解度進行了對比研究。
　　建立了大鼠血漿中黃體酮的HPLC-MS分析方法

5、，并考察了黃體酮納米晶注射液和市售黃體酮注射液在肌肉注射給藥后大鼠體內(nèi)的藥代動力學特征。
　　安全性評價部分中對黃體酮納米晶注射液進行了溶血實驗，定性且定量地分析了該注射液溶血性的大小。家兔肌肉刺激性實驗中，通過與市售黃體酮注射液的對比研究，判斷其刺激性的大小。
　　結果：
　　通過對黃體酮進行單一穩(wěn)定劑和復合穩(wěn)定劑的種類及用量篩選，確定了吐溫80為其單一保護劑，通過制備方法的比較，確定了濕磨機為優(yōu)選儀器，并通過調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)

6、速和研磨時間等工藝參數(shù)，進一步的優(yōu)化制備工藝。檢測時根據(jù)儀器要求和藥物本身的特點，確定了最佳檢測稀釋倍數(shù)為1000倍。
　　黃體酮納米晶注射液為乳白色混懸液體，將其稀釋至100μg/mL時，經(jīng)透射電子顯微鏡對黃體酮納米晶進行形貌分析，由結果可知，黃體酮納米晶體呈規(guī)則的長方形，邊緣較整齊，形態(tài)均一并且分布均勻，粒徑大小約300nm左右。經(jīng)X射線粉末衍射分析，黃體酮納米晶體和原料藥均由很多定形結構的晶型和少量無定形結構組成，在相同衍射

7、角處有形狀大小均相似的特征衍射峰，它們的晶型結構基本一致。在差示掃描量熱法分析中，黃體酮納米晶體和原料藥在相近溫度下出峰，相變溫度沒有大的改變。在傅氏轉(zhuǎn)換紅外線光譜法分析中，兩藥物均在相同波數(shù)下出峰，未出現(xiàn)新的吸收峰且吸收峰未發(fā)生位移或消失，說明官能團、結構未發(fā)生改變，制劑中無新的化學鍵產(chǎn)生。其化學結構未發(fā)生改變，晶型結構穩(wěn)定。
　　建立了黃體酮的 HPLC含量測定方法，黃體酮在2.034-152.52μg/mL（y=60.231

8、x-53.088，r＞0.999）濃度范圍內(nèi)線性關系良好。并將黃體酮納米晶注射液與原料藥做對比，搖床法測定其飽和溶解度，發(fā)現(xiàn)該注射液在水中的飽和溶解度約為原料藥的8倍，其飽和溶解度顯著提高。在透析法實驗中，發(fā)現(xiàn)黃體酮納米晶注射液在PBS溶液中釋放迅速，2h便可釋放90％，而黃體酮原料藥與輔料的物理混合物釋放則較為緩慢，接近40h時，釋放量才達到85%，黃體酮在制備為納米晶注射液后，釋放速率也顯著提高。
　　建立黃體酮在大鼠血漿中的

9、 HPLC-MS含量測定分析方法，藥物濃度在2ng/mL-5000ng/mL間有良好的線性關系，y=0.887041x+0.028667，相關系數(shù)r＞0.999。為排除大鼠個體內(nèi)、個體間差異及內(nèi)源性激素的影響，選用雄性SD插管大鼠進行自身對照實驗，分別于大腿肌肉外側注射黃體酮納米晶注射液和市售黃體酮注射液。結果兩制劑的達峰時間分別為8.4±13.5h和40±6.9h，達峰濃度分別為673.7±889.4μg/mL和258.3±603.3

10、μg/mL。黃體酮納米晶注射液的達峰時間顯著小于黃體酮注射液，Cmax和AUC0–t分別為黃體酮注射液的2.6和2.7倍，該注射液在大鼠體內(nèi)的生物利用度高于黃體酮注射液。
　　在黃體酮納米晶注射液的安全性評價中，對其進行了溶血試驗，發(fā)現(xiàn)在1h后，加入藥物較多的兩管溶液中出現(xiàn)了輕微溶血現(xiàn)象，直到3h，剩余各管均未出現(xiàn)溶血、凝集現(xiàn)象。參考相關文獻，在1小時后，3-5號試管均未出現(xiàn)部分或全部溶血和凝集反應的，均可用于注射。因此判斷，黃體

11、酮納米晶注射液的輕微溶血反應是可以被接受的。通過對其溶血性進行定量分析，發(fā)現(xiàn)隨著藥物的減少溶血率依次減小，且所有數(shù)值均小于5%，符合注射液安全性要求。在家兔肌肉刺激性實驗中，通過與市售黃體酮注射液的對比，其肌肉組織中，主要以肌纖維變性、炎性細胞的滲出為主，出血較少，范圍較廣，屬于早期炎癥反應。反應刺激性級數(shù)為2，屬于輕度刺激性。而市售制劑主要以肌纖維的萎縮、壞死和纖維結締組織增生為主，出血較多，范圍較廣，同時伴有大量的“囊泡”，屬于晚期

12、炎癥，刺激性級數(shù)為3-4，即中到重度刺激性。因此，黃體酮納米晶注射液的肌肉刺激性比市售黃體酮注射液小。
　　結論：
　　通過濕磨機制備及相關工藝參數(shù)的調(diào)整，對黃體酮納米晶注射液進行處方篩選和用量考察，初步篩選出合適的輔料及用量配比，并對其制備工藝進一步優(yōu)化；通過透射電鏡、激光粒度儀、差示掃描量熱法、X射線粉末衍射法和傅氏轉(zhuǎn)換紅外線光譜法分析中可知納米晶為300nm左右的規(guī)則長方形，分布均勻，晶型穩(wěn)定；搖床法和透析袋實驗中，黃