阿霉酮B長循環(huán)納米脂質(zhì)載體的構建及體內(nèi)外評價.pdf

1、孤兒受體Nur77（也稱TR3，NGFI-B，TIS1或NAK-1）是一種立刻早期基因的產(chǎn)物，是孤兒核受體亞家族NR4A的重要成員之一，可被神經(jīng)生長因子、血小板生長因子、血清及表皮生長因子等誘導表達，在各種生物學過程中發(fā)揮至關重要的作用，涉及細胞增殖、代謝、變異和凋亡等過程。Nur77常過度表達于腫瘤細胞中，如胃癌、肺癌、乳腺癌、結腸癌、卵巢癌等，對抑制腫瘤細胞生長具有極其重要的調(diào)控作用，是治療相關疾病的潛在靶點。殼囊孢菌素B(Cyto

2、sporoneB，Csn-B)是從小穴殼菌屬真菌HTF3中提取的一種天然產(chǎn)物，是天然的Nur77受體激動劑，與Nur77有強大親和作用并直接將其激活，使其從細胞核轉(zhuǎn)移到線粒體，通過改變Bcl-2的表型使其從腫瘤細胞的保護因子轉(zhuǎn)化為致死因子，觸發(fā)細胞色素C的釋放而殺滅腫瘤細胞。然而，低提取量限制了其進一步應用，一系列Csn-B衍生物相繼合成。阿霉酮衍生物Amoitone B是其中之一，經(jīng)藥理活性評價證實其抗腫瘤活性強于母化合物，是一種有潛

3、力的抗腫瘤藥物。其化學名為2-壬酰基-3，5-二羥基苯乙酸戊酯，分子式為C22H44O5，分子量為378.50，足一種類白色結晶性粉末，無臭無味，不溶于水，易溶于乙醇、甲醇、丙酮、DMSO等，呈一定的脂溶性。Amoitone B不溶于水的性質(zhì)使其制劑體外溶出差，嚴重影響其在體內(nèi)的吸收分布，降低了生物利用度，易被肝臟代謝，生物半衰期短，療效不佳，限制了臨床應用。
　　本課題以阿霉酮B(AMB)為模型藥物，以具有良好生物相容性和生物可

4、降解性的單硬脂酸甘油酯、聚乙二醇硬脂酸酯和中鏈甘油三酸酯為混合脂質(zhì)，采用乳化蒸發(fā)-低溫固化法制備阿霉酮B長循環(huán)納米脂質(zhì)載體(AMB-PEG-NLC)。實驗以包封率為主要考察指標，確定最佳處方工藝，并系統(tǒng)的研究了AMB-PEG-NLC凍干粉的制備工藝，研究了制劑體內(nèi)外性質(zhì)。
　　制備工藝為:藥脂比為1∶16，單硬脂酸甘油酯:聚乙二醇硬脂酸酯:中鏈甘油三酸酯2.5∶2.5∶1，表面活性劑用量2.5％，助表面活性劑卵磷脂的用量200mg

5、，攪拌速度1000rmp，溫度為75℃。AMB-PEG-NLC在電鏡下呈類球形，表面光滑不粘連，粒徑分布較窄，其粒徑為217.2±0.95nm，Zeta電位為-12.7±0.49mV，包封率為68.17±0.94％，載藥量為4.09±0.06％。
　　為增加AMB-PEG-NLC的貯存穩(wěn)定性，將其制成凍干粉，凍干工藝為:AMB-PEG-NLC中加入5％甘露醇，振搖使充分溶解，分裝于10mL西林瓶中，置-80℃的超低溫冰箱中冷凍24

6、h，然后放入冷凍干燥機凍干48h，即得AMB-PEG-NLC的凍干粉。對AMB-PEG-NLC凍干粉進行DSC和X射線衍射分析，結果表明AMB晶型狀態(tài)發(fā)生改變，證明其已被載體包載或吸附。采用透析袋法對AMB-PEG-NLC凍干粉體外釋放進行了考察，結果表明AMB-PEG-NLC的體外釋藥具有緩釋特征。以AMB-PEG-NLC的外觀、再分散性、含量和包封率為指標，初步考察了AMB-PEG-NLC凍干粉的穩(wěn)定性，結果表明AMB-PEG-NL

7、C凍干粉在25℃和4℃條件下放置三個月，可保持較好物理化學穩(wěn)定性。
　　本文采用HPLC法，測定了AmB-PEG-NLC經(jīng)家兔耳緣靜脈注射后在體內(nèi)的藥物動力學情況。靜脈注射AmB-PEG-NLC后，AUC=12.549hmg L-1，MRT=8.879h，t1/2=3.731h，CL=0.638L·h-1·kg-1，與阿霉酮B溶液(AmB-Sol)和阿霉酮B納米脂質(zhì)載體(AmB-NLC)相比，AUC與MRT明顯增大，清除率降低。<

8、br>　　本文采用MTT法考察AmB-PEG-NLC對人結腸癌SW620細胞和肝癌HepG2細胞的抑制作用。結果可以看出，在相同給藥劑量和培養(yǎng)時間條件下，AmB-PEG-NLC對癌細胞的抑制作用明顯強于AmB-Sol和AmB-NLC。原因可能是納米?？梢詢?nèi)吞的方式被細胞攝取，而納米脂質(zhì)載體所含脂質(zhì)材料具有極好的生物相容性增加了納米粒與細胞的粘附性，增長了藥物與細胞的作用時間。因此，AmB-PEG-NLC和AmB-NLC可增加細胞對藥物的

9、攝入量從而表現(xiàn)出更強的抑制作用。此外，由于PEG可溶于極性和非極性溶劑中并可以溶于細胞膜，PEG修飾的納米粒更容易進入細胞，因此AmB-PEG-NLC會使更多的AmB進入癌細胞，具有更強的細胞抑制作用。PI染色與DAPI染色后對細胞形態(tài)變化的研究進一步證實了長循環(huán)納米脂質(zhì)載體能促進腫瘤細胞的凋亡。為進一步研究AmB-PEG-NLC細胞凋亡機制，用流式細胞儀進行了凋亡檢測。結果表明，長循環(huán)納米脂質(zhì)載體可顯著增強AmB的癌細胞凋亡作用。