糖尿病對(duì)小鼠牙齒伸長(zhǎng)運(yùn)動(dòng)的影響.pdf

1、目的：
　　建立糖尿病小鼠伸長(zhǎng)運(yùn)動(dòng)實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ?，研究糖尿病小鼠牙齒垂直向伸長(zhǎng)過(guò)程中Ⅰ型膠原蛋白和富含酸性半胱氨酸的分泌蛋白（SPARC）的表達(dá)，探究小鼠牙齒伸長(zhǎng)運(yùn)動(dòng)的機(jī)制以及糖尿病對(duì)其的影響，為臨床上修復(fù)牙列缺損提供理論基礎(chǔ)。
　　方法：
　　60只雄性8周齡C57BL/6J小鼠，體重在19-25g左右。小鼠隨機(jī)分為兩組，即對(duì)照組（正常組）與實(shí)驗(yàn)組（糖尿病組），每組30只；每組再隨機(jī)分為5個(gè)亞組即0天、3天、6天、9天、1

2、2天組，每組各6只。實(shí)驗(yàn)組小鼠連續(xù)5天給予腹腔分次注射70mg/kg1％的鏈脲佐菌素（STZ），對(duì)照組注射同等劑量的檸檬酸緩沖液。注射后72小時(shí)后剪尾取血測(cè)量血糖，每周測(cè)量一次空腹血糖和體重，連續(xù)4周，空腹血糖值≥11.1mmol/L為建模成功，建模成功后進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。各組小鼠在3%水合氯醛全麻下行右側(cè)上頜后牙拔除術(shù)，壓迫止血拔牙部位。將兩組小鼠分別在0天、3天、6天、9天、12天處死，提取下頜骨。標(biāo)本在4%多聚甲醛溶液中固定24-48小時(shí)

3、，10%EDTA脫鈣液脫鈣40-50天，常規(guī)脫水、浸蠟、包埋，切片，HE染色，觀(guān)察拔牙后下頜牙齒伸長(zhǎng)運(yùn)動(dòng)過(guò)程中牙周?chē)M織細(xì)胞的變化；免疫組化染色，觀(guān)察實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組在SPARC與Ⅰ型膠原蛋白的表達(dá)差異，運(yùn)用免疫組化圖像進(jìn)行結(jié)果分析，測(cè)量表達(dá)面積與表達(dá)強(qiáng)度，計(jì)算平均灰度值與平均光密度（OD），用SPSS19.0統(tǒng)計(jì)學(xué)方法進(jìn)行數(shù)據(jù)處理。
　　結(jié)果：
　　形態(tài)學(xué)：鏡下與X線(xiàn)片顯示12天后兩組小鼠下頜磨牙向伸長(zhǎng)，實(shí)驗(yàn)組伸長(zhǎng)量小于對(duì)照

4、組（P<0.05）；體重變化:實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組體重3-6天下降（P<0.05），實(shí)驗(yàn)組體重下降程度大于對(duì)照組；9天兩組體重逐漸回升（P<0.05），12天時(shí)接近初始體重，實(shí)驗(yàn)組速度慢于對(duì)照組。HE染色：1.牙周膜寬度：實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組左右兩側(cè)第一磨牙根中1/3牙周膜寬度平均值無(wú)明顯變化（P>0.05）；2.破骨細(xì)胞計(jì)數(shù)：實(shí)驗(yàn)組骨基質(zhì)染色不均，骨線(xiàn)不整齊，骨質(zhì)疏松，0天至12天細(xì)胞隨時(shí)間呈增長(zhǎng)趨勢(shì)（P<0.05）；對(duì)照組0天時(shí)未見(jiàn)明顯破骨細(xì)胞

5、，3-12天破骨細(xì)胞逐漸增多，12天時(shí)最多（P<0.05），僅12天時(shí)實(shí)驗(yàn)組小于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），其他各時(shí)間組均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P>0.05）。
　　SPARC與Ⅰ型膠原蛋白免疫組化：隨著時(shí)間增加，平均灰度值逐漸降低，陽(yáng)性表達(dá)逐漸增強(qiáng)，SPARC的平均灰度值與Ⅰ型膠原蛋白在不同時(shí)間點(diǎn)上，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。SPARC在0天、3天、6天、9天、12天時(shí)，實(shí)驗(yàn)組顯著低于對(duì)照組，實(shí)驗(yàn)組表達(dá)強(qiáng)于對(duì)照組（

6、P<0.05）；Ⅰ膠原蛋白除第6天外，其他各組實(shí)驗(yàn)組顯著高于對(duì)照組，實(shí)驗(yàn)組表達(dá)低于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。SPARC和Ⅰ型膠原蛋白的OD值隨著時(shí)間的增加不斷增大，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。實(shí)驗(yàn)組Ⅰ型膠原蛋白OD值低于對(duì)照組，SPARC的 OD值顯著高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。
　　結(jié)論：
　　1.對(duì)照組與實(shí)驗(yàn)組小鼠拔除上頜牙后，對(duì)頜牙均有伸長(zhǎng)現(xiàn)象，且糖尿病小鼠骨質(zhì)疏松傾向伸長(zhǎng)量小于