急、慢性缺氧對斑馬魚幼魚神經(jīng)系統(tǒng)損傷機(jī)制的初步研究.pdf

1、南方醫(yī)科大學(xué)2 0 1 1 級碩士學(xué)位論文急、慢性缺氧對斑馬魚幼魚神經(jīng)系統(tǒng)損傷機(jī)制的初步研究P i l o ts t u d y o f m e c h a n i s m 0 f n e r V o u ss y s t e md a m a g e o fz e b r a f i s hl a r V a e c a u s e d b y a c u t e0 r c h r o n i c h y p O x i a課題來源：

2、學(xué)位申請人導(dǎo)師姓名專業(yè)名稱培養(yǎng)類型培養(yǎng)層次所在學(xué)院20 1 4趙丹王斌兒科學(xué)專業(yè)學(xué)位碩士珠江醫(yī)院摘要的理論依據(jù)。研究目的1 ．模擬缺氧窒息環(huán)境，建立斑馬魚幼魚缺氧性腦損傷模型，為新生兒缺氧性腦損傷提供經(jīng)濟(jì)、高效、便捷的實驗動物模型；2 ．比較急、慢性缺氧時斑馬魚幼魚腦組織氧化應(yīng)激指標(biāo)以及H I F ．1 0 c 、E P O 、p 5 3表達(dá)的變化，分析斑馬魚幼魚在急、慢性缺氧環(huán)境中腦組織的損傷機(jī)制，為迸一步從基因水平探討斑馬魚幼魚缺氧

3、性腦損傷發(fā)生機(jī)制提供新的思路；3 ．比較缺氧前、后斑馬魚幼魚腦組織神經(jīng)系統(tǒng)相關(guān)基因n e s t i n 、m b p 、s y n 2 a 的表達(dá)差異，初步探討差異表達(dá)的基因在缺氧后自身修復(fù)過程中的調(diào)控機(jī)制，為新生兒缺氧缺血性腦病的治療提供新的靶點。研究方法同一批次斑馬魚產(chǎn)下的6 d p f 幼魚隨機(jī)分為正常對照組、慢性缺氧組和急性缺氧組。首先將慢性缺氧組預(yù)先放入缺氧裝置，再向水中充入高純氮氣進(jìn)行缺氧，到達(dá)實驗終止時間點，將所有缺氧后

4、的幼魚撈出，即慢性缺氧組；當(dāng)水中溶氧量小于O ．5 m g ／L 時，將急性缺氧組放入缺氧裝置中，建立斑馬魚幼魚急性缺氧性腦損傷模型。采用神經(jīng)行為學(xué)觀察、H E 染色觀察腦組織病理變化等方法，對斑馬魚幼魚缺氧模型進(jìn)行評價；通過活體成像技術(shù)觀測各組幼魚的存活狀況、形態(tài)、心率( h e a n r a t e ，H R ) 和運動能力等指標(biāo)；H E 及甲苯胺藍(lán)神經(jīng)染色后，觀察受損腦組織病理形態(tài)的改變；各氧化應(yīng)激指標(biāo)檢測試劑盒測定各組斑馬魚幼

5、魚腦組織一氧化氮( N O ) 濃度、丙二醛( M D A ) 含量和超氧化物歧化酶( s O D )活性等氧化應(yīng)激指標(biāo)，探索缺氧對斑馬魚幼魚腦組織損傷的氧化應(yīng)激機(jī)制；采用吖啶橙染色觀察各實驗組斑馬魚幼魚腦部細(xì)胞的凋亡情況，用實時熒光定量P C R ( q R T - P C R ) 的方法，對不同缺氧組斑馬魚幼魚腦組織H I F ．1 0 【、E P O 、p 5 3基因表達(dá)以及缺氧前后n e s t i n 、m b p 、s y