布比卡因與左旋布比卡因?qū)Υ竽c癌細(xì)胞的作用及其與內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激通路的相關(guān)性研究.pdf

1、目的：
　　研究1mM布比卡因與1mM左旋布比卡因培養(yǎng)24-48小時(shí)后人大腸腺癌細(xì)胞系Caco-2的各項(xiàng)腫瘤細(xì)胞活性指標(biāo)以及內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激通路標(biāo)志蛋白的表達(dá)水平，包括：癌細(xì)胞遷移能力，核蛋白Ki67，膜聯(lián)蛋白V(Annexin V)和碘化丙啶(PI)，78kDa葡萄糖調(diào)節(jié)蛋白(Grp78)和C/EBP同源蛋白(CHOP)。
　　方法：
　　本實(shí)驗(yàn)于體外培養(yǎng)人大腸腺癌細(xì)胞株Caco-2并將細(xì)胞隨機(jī)分為四組：空白組(N組)；載

2、體對(duì)照組(V組)-1mM DPBS液；布比卡因組(B組)-1mM鹽酸布比卡因；左旋布比卡因組(L組)-1mM鹽酸左旋布比卡因。各組在相同條件下培養(yǎng)24小時(shí)后（劃痕實(shí)驗(yàn)取24小時(shí)與48小時(shí)兩個(gè)時(shí)間點(diǎn)），使用細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)以檢測(cè)癌細(xì)胞的遷移能力；使用免疫熒光技術(shù)計(jì)算Ki67陽性率比較組間細(xì)胞周期情況；使用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)膜聯(lián)蛋白V和碘化丙啶的表達(dá)情況以研究大腸癌細(xì)胞的凋亡水平；使用蛋白免疫印跡法和免疫熒光實(shí)檢測(cè)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激通路標(biāo)志蛋白Grp78和

3、CHOP的表達(dá)水平與核聚集現(xiàn)象。
　　結(jié)果：
　　在連續(xù)48小時(shí)體外培養(yǎng)過程中，布比卡因組(p<0.01)與左旋布比卡因組(p<0.001)的大腸癌細(xì)胞遷移速度顯著慢于空白組與載體對(duì)照組；在24小時(shí)培育后，B組與 L組的癌細(xì)胞胞核中Ki67的陽性率(B組為54.93±7.64，L組為57.23±8.04)顯著低于N組(92.33±6.74)和V組(98.66±1.17)(p<0.01)；通過流式細(xì)胞術(shù)測(cè)得24小時(shí)培育后，布比

4、卡因與左旋布比卡因處理并未引起大腸癌細(xì)胞的顯著凋亡；通過Western Blot和免疫熒光技術(shù)測(cè)得相比N組和V組，Grp78在B組和L組中表達(dá)明顯降低（p<0.05），而CHOP在B組和L組中表達(dá)明顯增高(p<0.05)，同時(shí)CHOP在熒光圖中呈現(xiàn)顯著的核聚集現(xiàn)象。
　　結(jié)論：
　　在體外培養(yǎng)的條件下，1mM布比卡因或左旋布比卡因24-48小時(shí)的處理可使人大腸腺癌細(xì)胞的遷移能力與增殖能力受到同等水平的顯著抑制但不能誘發(fā)凋亡，