Salubrinal協(xié)同雷帕霉素抑制人膽管癌細(xì)胞的作用及其機(jī)制.pdf

1、目的：研究真核翻譯起始因子2α（eukaryotic translation initiation factors2，eIF2α）抑制劑salubrinal（sal）協(xié)同雷帕霉素（rapamycin，rap）對(duì)人膽管癌細(xì)胞的抑制效果及其分子機(jī)制。
　　方法：培養(yǎng)人膽管癌細(xì)胞系QBC939和RBE細(xì)胞，用rap抑制膽管癌細(xì)胞mTOR信號(hào)通路，采用eIF2α抑制劑sal單獨(dú)或與rap聯(lián)合處理細(xì)胞、Bcl-xL抑制劑ABT-737單獨(dú)或

2、與rap聯(lián)合處理細(xì)胞，通過(guò)向裸鼠皮下注射QBC939實(shí)現(xiàn)荷瘤，荷瘤后給不同實(shí)驗(yàn)組加相應(yīng)的藥物進(jìn)行干預(yù)，監(jiān)測(cè)小鼠荷瘤效果，用免疫印跡分析藥物干預(yù)后腫瘤細(xì)胞和成瘤癌組織中相關(guān)分子以及凋亡相關(guān)分子PARP、Cleaved Caspase-3表達(dá)水平，用CCK-8檢測(cè)細(xì)胞增殖速率，免疫組化分析藥物干預(yù)對(duì)小鼠荷瘤組織增殖的影響。
　　結(jié)果：（1）Rap抑制CCA細(xì)胞增殖：免疫印跡（Western blot）分析結(jié)果說(shuō)明rap可以抑制CCA細(xì)

3、胞中mTOR通路的活化，CCK-8檢測(cè)證實(shí)rap對(duì)QBC939和RBE細(xì)胞的增殖起抑制作用，并且呈時(shí)間依賴性抑制（P<0.05）；此外，rap未引起QBC939和RBE細(xì)胞明顯凋亡（數(shù)據(jù)未展示）；（2）Sal抑制CCA細(xì)胞增殖：Western blot結(jié)果表明eIF2α/ATF4信號(hào)通路在CCA細(xì)胞中呈過(guò)度活化狀態(tài)，并且sal可以抑制eIF2α的活性， CCK-8檢測(cè)證實(shí)sal對(duì)QBC939和RBE細(xì)胞的增殖起抑制作用，并且呈時(shí)間依賴性

4、抑制（P<0.05）；此外，sal未引起QBC939和RBE細(xì)胞明顯凋亡（數(shù)據(jù)未展示）；（3）Sal抑制CCA細(xì)胞成瘤：在體內(nèi)實(shí)驗(yàn)中，sal抑制QBC939在裸鼠體內(nèi)的荷瘤能力，并通過(guò)免疫組化證實(shí)sal抑制QBC939細(xì)胞體內(nèi)細(xì)胞增殖能力；（4）Sal和rap聯(lián)合應(yīng)用抑制CCA細(xì)胞成瘤：在裸鼠體內(nèi)sal和rap單獨(dú)干預(yù)抑制QBC939細(xì)胞的成瘤，二者聯(lián)合干預(yù)協(xié)同抑制QBC939細(xì)胞的成瘤；（5）Sal和rap聯(lián)合應(yīng)用協(xié)同抑制CCA細(xì)胞成

5、瘤的機(jī)制：免疫組化證實(shí)sal和rap聯(lián)合干預(yù)比單獨(dú)sal或rap干預(yù)表現(xiàn)出對(duì)荷瘤的QBC939細(xì)胞生長(zhǎng)更強(qiáng)的抑制作用；在體外實(shí)驗(yàn)中，CCK-8分析結(jié)果提示sal和rap對(duì)QBC939細(xì)胞增殖有協(xié)同抑制作用（P<0.05）。用Western blot分析表明在QBC939細(xì)胞中sal處理不僅可以下調(diào)p-AKT的表達(dá)還可消除rap誘導(dǎo)的p-AKT表達(dá)上調(diào)；在體外實(shí)驗(yàn)中，Western blot結(jié)果表明sal和rap單獨(dú)或聯(lián)合應(yīng)用未引起QBC

6、939和RBE細(xì)胞中PARP和Caspase-3的活化剪切；而且在體內(nèi)實(shí)驗(yàn)中，Western blot結(jié)果證實(shí)sal或rap單獨(dú)干預(yù)未引起荷瘤的QBC939中PARP和Caspase-3的活化剪切，而聯(lián)合應(yīng)用時(shí)引起了PARP和Caspase-3明顯的活化剪切，并且sal處理可以消除rap誘導(dǎo)的p-AKT和Bcl-xL表達(dá)上調(diào)；用Bcl-xL抑制劑ABT-737處理后抑制QBC939細(xì)胞成瘤，并且 ABT-737和rap聯(lián)合應(yīng)用比ABT-

7、737或rap單獨(dú)干預(yù)表現(xiàn)出對(duì)QBC939細(xì)胞成瘤的更強(qiáng)抑制效應(yīng)；Western blot結(jié)果表明在QBC939成瘤組織中，ABT-737和rap聯(lián)合應(yīng)用引起了PARP和Caspase-3明顯的活化剪切；Western blot結(jié)果證實(shí)，ABT-737和rap聯(lián)合應(yīng)用在培養(yǎng)的QBC939細(xì)胞中引起了PARP和Caspase-3明顯的活化剪切。
　　結(jié)論：Sal和rap聯(lián)合應(yīng)用對(duì)膽管癌細(xì)胞有協(xié)同的抑制效應(yīng)；Sal和rap可以部分通過(guò)