經(jīng)胃自然腔道內(nèi)鏡手術(shù)(TG-NOTES)預(yù)防感染的基礎(chǔ)研究.pdf

1、本文對(duì)經(jīng)胃自然腔道內(nèi)鏡手術(shù)（TG--NOTES）預(yù)防感染進(jìn)行了基礎(chǔ)研究
　　第一部分 人體胃液菌群分析
　　目的:研究表明人體胃腔內(nèi)存在很多通過適應(yīng)了胃內(nèi)環(huán)境而得以長期存在的細(xì)菌，而胃腔內(nèi)菌群的變化則與人體的某些消化系統(tǒng)疾病息息相關(guān)。本研究采用傳統(tǒng)實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)法和細(xì)菌的16 s-rDNA檢測(cè)的兩種方法明確胃液內(nèi)菌群的種類，確定有無致病菌，為后期TG-NOTES預(yù)防感染的研究奠定基礎(chǔ)。
　　方法:本研究采用臨床試驗(yàn)的方法，

2、提取2015年3月至2015年6月在長海醫(yī)院消化內(nèi)鏡中心行常規(guī)胃鏡檢查診斷為淺表性胃炎40例患者胃腔內(nèi)胃液，采用兩種方法行細(xì)菌檢測(cè)，一種送往本院細(xì)菌檢測(cè)室(20例)，進(jìn)行細(xì)菌菌落數(shù)觀察及菌種鑒定。另外一種由上海瑞翌生物有限公司通過測(cè)定細(xì)菌16s-rDNA方式代為檢測(cè)(20例)。
　　結(jié)果:我院細(xì)菌檢測(cè)室培養(yǎng)出的細(xì)菌以革蘭陽性菌、革蘭陰性菌和真菌為主，包括:金黃色葡萄球菌、微黃奈瑟菌、粘滑羅氏菌、口腔/緩癥鏈、芽孢桿菌、白色念珠菌等

3、。16s-rDNA檢測(cè)結(jié)果表明胃腔內(nèi)的細(xì)菌前20種主要的細(xì)菌含量由多到少包括:普雷沃菌屬(Prevotella)、Helicobacter(Hp)、奈瑟菌屬(Neisseria)、嗜血桿菌屬（Haemophilus）、韋榮氏球菌屬(Veillonella)、梭桿菌屬(Fusobacterium)、卟啉菌屬(Porphyromonas)、鏈球菌屬（Streptococcus）、Saccharibacteria_genera_incerta

4、e_sedis、擬普雷沃菌屬(Alloprevotella)、纖毛菌屬(Leptotrichia)、碳酸噬胞菌屬(Capnocytophaga)、嗜酸乳桿菌屬（SR1_genera_incertae_sedis）、顆粒鏈菌屬(Granulicatella)、彎曲菌屬(Campylobacter)羅氏菌屬(Rothia)、回線屬(Treponema)、消化鏈球菌屬(Peptostreptococcus)、桿菌屬(Aggregatibact

5、er)、放線菌屬(Actinomyces)。
　　結(jié)論:傳統(tǒng)細(xì)菌培養(yǎng)法和16s-rDNA方法均提示胃腔內(nèi)為有菌環(huán)境，且細(xì)菌種類較多，其中不乏致病菌?？梢娊?jīng)胃自然腔道內(nèi)鏡手術(shù)(TG-NOTES)局部胃腔消毒具有明確的必要性。
　　第二部分 局部灌洗消毒劑對(duì)大鼠急性毒性觀察
　　目的:前期研究發(fā)現(xiàn)胃腔為有菌環(huán)境，局部灌洗消毒預(yù)防TG-NOTES手術(shù)感染具有確切效果，目前報(bào)道應(yīng)用較多且消毒效果和安全性均較確切的局部粘膜消毒劑

6、主要是洗必泰和聚維酮碘，然而目前尚無洗必泰和聚維酮碘應(yīng)用于人體胃腔消毒的相關(guān)報(bào)道。本階段研究目的為通過動(dòng)物實(shí)驗(yàn)明確胃腔內(nèi)局部灌洗洗必泰或聚維酮碘對(duì)SD大鼠有無急性毒性作用，為下一步應(yīng)用于臨床研究奠定基礎(chǔ)。
　　方法:本研究采用動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的方法，通過予SD大鼠經(jīng)口分別灌注洗必泰、聚維酮碘以及生理鹽水（20ml/kg），觀察大鼠一般情況，胃粘膜及肝腎組織病理切片，以及血液指標(biāo)（血常規(guī)、肝腎功能等），明確局部灌洗消毒劑對(duì)大鼠急性毒性反應(yīng)。

7、
　　結(jié)果:口服給藥1h，24h，48h，7天，14天后，大鼠未見死亡。觀察大鼠一般情況，其行為活動(dòng)、外觀體征、呼吸、糞便性狀及給藥局部胃黏膜均未見明顯異常。灌洗大鼠血液學(xué)指標(biāo)檢測(cè)結(jié)果表明，灌洗組大鼠無論雌性還是雄性其血常規(guī)指標(biāo)及生化指標(biāo)與對(duì)照組比較三組間差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＞0.05）。肝腎組織病理切片提示肝腎組織均無明顯組織和結(jié)構(gòu)破壞。灌洗后胃粘膜各層次結(jié)構(gòu)完整，未見明顯出血點(diǎn)及炎性滲出。
　　結(jié)論:胃腔灌洗洗必泰或聚

8、維酮碘對(duì)大鼠無急性毒性作用。
　　第三部分 洗必泰和聚維酮碘灌洗胃腔預(yù)防經(jīng)胃自然腔道內(nèi)鏡手術(shù)(TG-NOTES)感染的臨床研究
　　目的:前期研究表明胃腔為有菌環(huán)境，存在灌洗消毒的必要性，同時(shí)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)證實(shí)局部灌洗洗必泰和聚維酮碘對(duì)SD大鼠無急性毒性作用。本部分研究的目的是通過臨床試驗(yàn)明確人體胃腔內(nèi)局部灌洗洗必泰和聚維酮碘前后胃腔菌群的變化情況，明確TG-NOTES手術(shù)中局部胃腔灌洗洗必泰和聚維酮碘是否可以預(yù)防感染，同時(shí)比對(duì)兩

9、種消毒劑的消毒效果，明確效果最佳的消毒劑。
　　方法:本研究采用臨床試驗(yàn)的方法，以2015年3月至2015年6月在長海醫(yī)院消化內(nèi)科常規(guī)行胃鏡檢查診斷為淺表性胃炎的40例病人，聚維酮碘灌洗組20例，洗必泰灌洗組20例，患者取側(cè)臥位，常規(guī)靜脈麻醉后，應(yīng)用Olympus GIF-260滅菌胃鏡常規(guī)進(jìn)鏡至胃腔，留取胃腔內(nèi)消化液20ml（標(biāo)本A）;吸除胃腔內(nèi)殘存液體，然后分別使用洗必泰溶液、聚維酮碘各300ml噴灑灌洗，維持5min后，再用

10、無菌生理鹽水100ml沖洗胃腔，留取沖洗液20ml(標(biāo)本B、標(biāo)本C)。標(biāo)本送檢細(xì)菌培養(yǎng)及鑒定。術(shù)后24h觀察患者有無腹痛、惡心、嘔吐等消化道不適癥狀。
　　結(jié)果:所有患者均順利完成常規(guī)胃鏡檢查術(shù)。我院細(xì)菌檢測(cè)方法無論是聚維酮碘組還是洗必泰組灌洗消毒后均未檢測(cè)到細(xì)菌，16s-rDNA檢測(cè)方法結(jié)果表明洗必泰和聚維酮碘灌洗后，細(xì)菌種類和豐度較灌洗前明顯降低。顯著性差異方面:消毒后胃腔內(nèi)致病菌種類較消毒前明顯減少，兩種消毒劑組間差異性分析

11、未見OTU水平的差異，未找到屬水平差異，也未找到所有水平差異。洗必泰組患者無任何不適，聚維酮碘組(3/20)出現(xiàn)2例惡心及1例嘔吐，未予治療后自行緩解。兩組間比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，兩種消毒劑副作用情況無差異。
　　結(jié)論:TG-NOTES術(shù)前使用洗必泰或聚維酮碘溶液灌洗胃腔預(yù)防感染效果確切，灌洗后胃腔內(nèi)細(xì)菌明顯減少，基本達(dá)到無菌狀態(tài)。此外，兩種消毒劑安全有效，副作用小。
　　第四部分 新型縫合夾和傳統(tǒng)閉合夾在經(jīng)胃自然腔道內(nèi)鏡手

12、術(shù)(TG-NOTES)切口閉合療效的對(duì)比研究
　　目的:胃壁切口閉合的質(zhì)量是影響TG-NOTES術(shù)后感染的重要因素，目前應(yīng)用于NOTES手術(shù)切口閉合有多種方法，效果不一。本研究擬采用動(dòng)物試驗(yàn)的方法，對(duì)比現(xiàn)有的單純金屬閉合夾和新型縫合夾的閉合效果。
　　方法:12只雌性實(shí)驗(yàn)豬，常規(guī)胃竇部位黏膜全層切除，創(chuàng)面穿透至腹腔模擬TG-NOTES，病灶切除范圍直徑3-5cm，6例應(yīng)用金屬夾夾閉，6例應(yīng)用新型縫合夾，對(duì)比評(píng)估夾閉時(shí)間、夾子

13、數(shù)量、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的存活情況、術(shù)前術(shù)后胃腔細(xì)菌菌落計(jì)數(shù)、術(shù)后血常規(guī)白細(xì)胞及術(shù)后體溫波動(dòng)情況。
　　結(jié)果:常規(guī)黏膜全層切除術(shù)后，縫合夾組夾閉時(shí)間平均為8.54min;夾子數(shù)量平均4.16個(gè);普通金屬夾組夾閉時(shí)間平均為10.73 min，夾子數(shù)量平均8.66個(gè)，普通金屬夾組出現(xiàn)1例死亡，余全部存活。兩組術(shù)后血常規(guī)白細(xì)胞及體溫情況差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。兩種消毒劑灌洗后術(shù)前術(shù)后菌落計(jì)數(shù)有明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)論:新型縫合夾無論是在夾閉時(shí)間