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1、植物中的黃酮類(lèi)物質(zhì)具有抗氧化、抗炎和抗細(xì)胞凋亡等作用,因此大多數(shù)的學(xué)者認(rèn)為黃酮類(lèi)物質(zhì)能夠保護(hù)心肌細(xì)胞對(duì)抗心肌缺血再灌注造成的損傷。但是最新的研究發(fā)現(xiàn),一些黃酮類(lèi)化合物在特定的條件下也對(duì)心肌細(xì)胞產(chǎn)生了一些不利影響,這有可能加重心肌細(xì)胞在缺血再灌注狀態(tài)下的損傷。不過(guò)黃酮類(lèi)化合物對(duì)心肌細(xì)胞造成不利影響的機(jī)制尚不明確。目前已知黃酮類(lèi)化合物能激活細(xì)胞中芳香烴受體(aryl hydrocarbon receptor,Ahr),Ahr能夠影響細(xì)胞內(nèi)多
2、條信號(hào)通路,進(jìn)而能夠發(fā)揮多種生理或病理功能。我們推測(cè)黃酮類(lèi)化合物在激活A(yù)hr后可能產(chǎn)生了一些對(duì)心肌細(xì)胞在缺血再灌注條件下不利的影響。
目的:本實(shí)驗(yàn)選用槲皮黃酮和β-萘黃酮來(lái)處理在缺血再灌注狀態(tài)下的心肌細(xì)胞,一方面考察這些黃酮類(lèi)物質(zhì)是否具有對(duì)心肌細(xì)胞的保護(hù)作用,另一方面研究了這些黃酮類(lèi)物質(zhì)對(duì)Ahr下游的信號(hào)分子的影響,探究這些信號(hào)分子是否介導(dǎo)了黃酮類(lèi)物質(zhì)對(duì)心肌細(xì)胞產(chǎn)生的不利影響。
方法:為了構(gòu)建了心肌H9c2細(xì)胞缺血再
3、灌注模型,我們將該細(xì)胞在缺氧缺糖的條件下(0.5%的氧氣濃度,無(wú)糖培養(yǎng)基)培養(yǎng)24小時(shí),模擬心肌細(xì)胞的缺血狀態(tài),然后將該細(xì)胞轉(zhuǎn)移至正常含糖培養(yǎng)基中在正常氧濃度條件下繼續(xù)培養(yǎng)24小時(shí),模擬心肌恢復(fù)供血。在藥物添加組中,心肌H9c2細(xì)胞在缺血再灌注狀態(tài)下用槲皮黃酮或是β-萘黃酮處理48小時(shí)。然后利用流式細(xì)胞儀、乳酸脫氫酶和細(xì)胞中caspase-3蛋白水平檢測(cè)來(lái)評(píng)估心肌細(xì)胞的損傷;通過(guò)測(cè)定心肌細(xì)胞中自由基(Reactive oxygen sp
4、ecies,ROS)和抗氧化能力來(lái)評(píng)估心肌細(xì)胞的氧化還原狀態(tài);免疫組化,免疫共沉淀和Western blot檢測(cè)用來(lái)研究槲皮黃酮或是β-萘黃酮對(duì)Ahr下游的信號(hào)分子的影響。
結(jié)果:在心肌H9c2細(xì)胞缺血再灌注模型中,細(xì)胞中caspase-3蛋白水平升高,凋亡率明顯增加,培養(yǎng)基中乳酸脫氫酶濃度上升,這都說(shuō)明缺血再灌注對(duì)心肌細(xì)胞造成嚴(yán)重?fù)p傷,誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡,但是添加槲皮黃酮和β-萘黃酮能夠保護(hù)心肌細(xì)胞,防止細(xì)胞死亡。心肌H9c2細(xì)胞
5、缺血再灌注模型中,細(xì)胞中ROS的水平明顯升高,抗氧化能力下降。槲皮黃酮和β-萘黃酮抑制細(xì)胞中ROS的產(chǎn)生,增強(qiáng)了細(xì)胞的抗氧化能力。通過(guò)免疫組化,免疫共沉淀和Western blot檢測(cè)我們發(fā)現(xiàn)槲皮黃酮和β-萘黃酮激活了Ahr,使其轉(zhuǎn)移進(jìn)入細(xì)胞核內(nèi)與Ahr細(xì)胞核轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白(Ahr nuclear translocator,ARNT)結(jié)合,從而抑制低氧誘導(dǎo)因子(hypoxia-inducible factor,HIF-1α)與ARNT結(jié)合,使
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