黃酮在心肌細胞缺血再灌注中的雙向調(diào)節(jié)作用.pdf

1、植物中的黃酮類物質(zhì)具有抗氧化、抗炎和抗細胞凋亡等作用，因此大多數(shù)的學者認為黃酮類物質(zhì)能夠保護心肌細胞對抗心肌缺血再灌注造成的損傷。但是最新的研究發(fā)現(xiàn)，一些黃酮類化合物在特定的條件下也對心肌細胞產(chǎn)生了一些不利影響，這有可能加重心肌細胞在缺血再灌注狀態(tài)下的損傷。不過黃酮類化合物對心肌細胞造成不利影響的機制尚不明確。目前已知黃酮類化合物能激活細胞中芳香烴受體(aryl hydrocarbon receptor，Ahr)，Ahr能夠影響細胞內(nèi)多

2、條信號通路，進而能夠發(fā)揮多種生理或病理功能。我們推測黃酮類化合物在激活A(yù)hr后可能產(chǎn)生了一些對心肌細胞在缺血再灌注條件下不利的影響。
　　目的:本實驗選用槲皮黃酮和β-萘黃酮來處理在缺血再灌注狀態(tài)下的心肌細胞，一方面考察這些黃酮類物質(zhì)是否具有對心肌細胞的保護作用，另一方面研究了這些黃酮類物質(zhì)對Ahr下游的信號分子的影響，探究這些信號分子是否介導了黃酮類物質(zhì)對心肌細胞產(chǎn)生的不利影響。
　　方法:為了構(gòu)建了心肌H9c2細胞缺血再

3、灌注模型，我們將該細胞在缺氧缺糖的條件下（0.5％的氧氣濃度，無糖培養(yǎng)基）培養(yǎng)24小時，模擬心肌細胞的缺血狀態(tài)，然后將該細胞轉(zhuǎn)移至正常含糖培養(yǎng)基中在正常氧濃度條件下繼續(xù)培養(yǎng)24小時，模擬心肌恢復供血。在藥物添加組中，心肌H9c2細胞在缺血再灌注狀態(tài)下用槲皮黃酮或是β-萘黃酮處理48小時。然后利用流式細胞儀、乳酸脫氫酶和細胞中caspase-3蛋白水平檢測來評估心肌細胞的損傷;通過測定心肌細胞中自由基(Reactive oxygen sp

4、ecies，ROS)和抗氧化能力來評估心肌細胞的氧化還原狀態(tài);免疫組化，免疫共沉淀和Western blot檢測用來研究槲皮黃酮或是β-萘黃酮對Ahr下游的信號分子的影響。
　　結(jié)果:在心肌H9c2細胞缺血再灌注模型中，細胞中caspase-3蛋白水平升高，凋亡率明顯增加，培養(yǎng)基中乳酸脫氫酶濃度上升，這都說明缺血再灌注對心肌細胞造成嚴重損傷，誘導細胞凋亡，但是添加槲皮黃酮和β-萘黃酮能夠保護心肌細胞，防止細胞死亡。心肌H9c2細胞

5、缺血再灌注模型中，細胞中ROS的水平明顯升高，抗氧化能力下降。槲皮黃酮和β-萘黃酮抑制細胞中ROS的產(chǎn)生，增強了細胞的抗氧化能力。通過免疫組化，免疫共沉淀和Western blot檢測我們發(fā)現(xiàn)槲皮黃酮和β-萘黃酮激活了Ahr，使其轉(zhuǎn)移進入細胞核內(nèi)與Ahr細胞核轉(zhuǎn)運蛋白(Ahr nuclear translocator，ARNT)結(jié)合，從而抑制低氧誘導因子(hypoxia-inducible factor，HIF-1α)與ARNT結(jié)合，使