肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子對(duì)肺高血壓的作用及其機(jī)制的研究.pdf

1、本文主要從以下幾個(gè)部分展開(kāi)論述：
　　Ⅰ HGF對(duì)肺動(dòng)脈高壓大鼠的作用及抗炎機(jī)制
　　目的：
　　1.HGF抗炎干預(yù)對(duì)PAH大鼠血流動(dòng)力學(xué)及右心功能的影響。
　　2.HGF抗炎干預(yù)PAH大鼠的作用機(jī)制及信號(hào)通路。
　　方法：
　　1.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物與分組
　　選擇雄性Wistar大鼠40只，隨機(jī)分為5組(n=8)，包括1）對(duì)照組:皮下注射生理鹽水1次(1 mg/kg);2)PAH組:采用腹腔注射野百合

2、堿(60mg/kg)復(fù)制PAH模型;3）HGF組:在肺動(dòng)脈高壓模型建立成功（2周）后給與尾靜脈注射HGF(1mg/kg);4）HGF-D組(HGF-Double):在肺動(dòng)脈高壓模型建立成功（2周）后給與尾靜脈注射HGF翻倍劑量（2mg/kg）;5）HGF+Q組(HGF+quercetin):在肺動(dòng)脈高壓模型建立成功（2周）后，HGF(1mg/kg)干預(yù)前6小時(shí)給與槲皮素(5mg/100g)腹腔注射抑制HSP70。
　　2.觀察各組

3、大鼠的一般情況變化，如體重，呼吸急促，進(jìn)食及死亡情況等。
　　3.心導(dǎo)管檢查測(cè)量各組大鼠mPAP和PVR
　　各組大鼠觀察至4周，麻醉后行氣管插管，動(dòng)物呼吸機(jī)維持呼吸，連接壓力換能器，將三通管與3Frliller右心導(dǎo)管相連，右心導(dǎo)管內(nèi)充滿生理鹽水，將連接壓力換能器的的右心導(dǎo)管放至肺動(dòng)脈。多導(dǎo)生理記錄儀記錄下穩(wěn)定的右心室、肺動(dòng)脈壓力波形。
　　結(jié)果：
　　1.HGF對(duì)肺動(dòng)脈高壓大鼠一般情況影響
　　PAH組

4、大鼠在注射MCT后第2周時(shí)開(kāi)始出現(xiàn)活動(dòng)減慢，皮毛不光順，體重下降，并隨時(shí)間延長(zhǎng)而逐漸加重，部分大鼠出現(xiàn)口鼻紫紺，甚至有明顯呼吸急促，觀察至4周時(shí)死亡2只，死亡大鼠尸檢顯示肺組織表面有點(diǎn)片狀出血，腹腔積液。HGF組上述表現(xiàn)明顯減輕，口鼻紫紺表現(xiàn)輕微，觀察至4周時(shí)沒(méi)有發(fā)生死亡，體重較PAH組增加。HGF+Q組PAH大鼠癥狀較HGF組加重，但較PAH組仍有改善，觀察至4周時(shí)死亡1只。HGF-D組與HGF組大鼠比較體重變化不明顯，無(wú)大鼠死亡。<

5、br>　　2.HGF對(duì)mPAP及PVR的影響
　　HGF組mPAP和PVR水平較PAH組明顯降低(P＜0.05)，仍高于對(duì)照組;HGF-D組mPAP及PVR與HGF組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05);HGF+Q組mPAP及PVR水平均高于HGF組(P＜0.05)，但仍低于PAH組。
　　3.HGF對(duì)各組RVH1水平影響
　　HGF組大鼠右室肥厚較PAH組減輕，RVHI水平低于PAH組(P＜0.05)，但仍高于對(duì)照組

6、;HGF-D組大鼠RVHI水平與HGF組比較無(wú)明顯差異(P＞0.05);HGF+Q組大鼠RVHI水平明顯高于HGF組(P＜0.05)，仍低于PAH組。
　　結(jié)論：
　　1.HGF通過(guò)抗炎和降低炎癥因子水平減輕肺動(dòng)脈高壓大鼠肺組織炎癥反應(yīng)，降低肺動(dòng)脈平均壓，肺血管阻力及右心肥厚指數(shù)，提高PAH大鼠右心功能，改善PAH大鼠癥狀。
　　2.HGF減輕炎癥反應(yīng)和降低炎癥因子水平與誘發(fā)HSP70高表達(dá)而抑制NF-κB信號(hào)通路有關(guān)

7、，提示HSP70/NF-κB通路是HGF抗炎降低肺動(dòng)脈高壓的重要通路之一。
　?、?肺高血壓患者血清HGF水平及意義
　　目的：
　　1.肺高血壓患者血清HGF水平及意義。
　　2.血清HGF與肺高血壓患者mPAP，PVR和心臟功能的相關(guān)性。
　　方法：
　　入選正常健康人群組25例，肺高血壓(PH)病人組73例，PH入選標(biāo)準(zhǔn)采用2013年NICE世界肺高血壓論壇發(fā)布的《肺高血壓診斷和治療建議》，肺高

8、血壓患者按肺動(dòng)脈平均壓水平分為3組，25mmHg≤mPAP≤30mmHg為輕度肺高血壓組（L組），30mmHg＜mPAP＜50mmHg為中度肺高血壓（M組），mPAP≥50mmHg為重度肺高血壓（H組）。另根據(jù)或者是否存在繼發(fā)性因素，將肺高血壓組病人分為特發(fā)性肺動(dòng)脈高壓(IPAH)組及繼發(fā)性肺高血壓(PPH)組進(jìn)行比較。
　　所有患者均簽署知情同意書(shū)。排除標(biāo)準(zhǔn):1.肝臟或腫瘤疾病引起的PH;2.合并肝炎疾病的患者;3.門(mén)脈高壓相關(guān)

9、的PH;4.慢性腎功能不全引起的PH;5.無(wú)法配合完成右心導(dǎo)管檢查的病人。
　　收集患者臨床一般資料，包括年齡、性別，肥胖，高血壓史，糖尿病史，吸煙史等。PH組患者行右心導(dǎo)管檢查，測(cè)定mPAP、PVR及心臟指數(shù)(Cardiac Index，CI)等指標(biāo)，入院后次日清晨采集患者上肢靜脈血，離心后收集血清，-80℃保存，ELISA法檢測(cè)HGF水平，測(cè)定樣品的O.D值，繪制吸光值-濃度曲線，根據(jù)曲線得出相關(guān)濃度值，自動(dòng)生化分析儀測(cè)NT-

10、proBNP、CRP及ALT水平，對(duì)照組入選人群抽血后處理同上。
　　統(tǒng)計(jì)分析：
　　對(duì)于計(jì)量資料進(jìn)行正態(tài)性檢驗(yàn)，符合正態(tài)分布的資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，非正態(tài)分布資料采用中位數(shù)(P25，P75)表示。兩組間比較采用t檢驗(yàn)，多組間比較應(yīng)用SNK檢驗(yàn)，非正態(tài)分布資料比較采用Mann-Whitney Test，直線相關(guān)分析兩個(gè)指標(biāo)間的相關(guān)性，多元逐步回歸分析肺動(dòng)脈壓與HGF相關(guān)性，對(duì)計(jì)數(shù)資料采用x2檢驗(yàn)。采用SPSS15.0統(tǒng)計(jì)軟

11、件進(jìn)行分析，P＜0.05具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
　　結(jié)果：
　　1.入選者一般情況
　　各組間人群年齡、性別、肥胖比率無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;三組肺高血壓患者的高血壓比例、糖尿病人數(shù)及吸煙數(shù)比較無(wú)差異;PH病人接受藥物治療包括前列腺素、內(nèi)皮素拮抗劑、5型磷酸二酯酶抑制劑、利尿劑及聯(lián)合用藥（大于等于兩種治療藥物），隨著肺動(dòng)脈壓力增加接受治療人數(shù)比例增加。
　　2.肺動(dòng)脈壓相關(guān)指標(biāo)
　　H組和M組血清PVR值均明顯高于L組（P

12、均＜0.05），M組與L組比較同樣有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);CI水平則隨著mPAP的升高而降低，H組和M組CI值低于L組，H組較M組明顯減低(P＜0.05)。
　　3.各組血清HGF水平比較
　　肺高血壓患者血清HGF水平(2.220±1.670ng/ml)顯著高于正常人群(P＜0.05);L組HGF水平也顯著高于對(duì)照組(P＜0.05);M組與L組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);H組HGF水平明顯高于M組和L組（P

13、均＜0.05）。
　　繼發(fā)性肺高血壓組（50例）(2.649±1.875 ng/mL)與特發(fā)性肺動(dòng)脈高壓組（23例）(1.632±1.192ng/mL) HGF水平比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)論：
　　1.肺高血壓患者血清HGF水平明顯升高，且和mPAP有相關(guān)性，說(shuō)明HGF與肺高血壓有一定的關(guān)系。
　　2.肺高血壓患者血清CRP水平明顯升高，和mPAP和PVR呈正相關(guān)，提示炎癥因素與肺高血壓有相關(guān)性。