保定市多重耐藥銅綠假單胞菌氨基糖苷類修飾酶基因的檢測(cè)及分析.pdf

1、目的：
　　1、掌握保定市臨床分離銅綠假單胞菌的耐藥性情況。
　　2、掌握多重耐藥銅綠假單胞菌氨基糖苷類耐藥基因的分布情況，為指導(dǎo)臨床合理使用抗生素、減緩細(xì)菌耐藥產(chǎn)生、有效預(yù)防和控制院內(nèi)感染提供依據(jù)。
　　方法：
　　1、菌株來(lái)源
　　從2016年1月至2016年8月，收集保定市第一中心醫(yī)院臨床標(biāo)本中分離培養(yǎng)出的不重復(fù)之銅綠假單胞菌，按照《全國(guó)臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程》第三版的標(biāo)準(zhǔn)，用VITEK-2全自動(dòng)微生物鑒定

2、儀鑒定菌種。
　　2、鑒定及藥敏試驗(yàn)
　　對(duì)銅綠假單胞菌菌種進(jìn)行純化，用vitek-2全自動(dòng)微生物鑒定儀鑒定菌種，而后采用K-B法測(cè)定其對(duì)阿米卡星等20種抗菌藥物的敏感性。
　　3、耐藥基因檢測(cè)
　　選取多重耐藥銅綠假單胞菌，使用 Maxwell?16 Cell LEV DNA Purification Kit試劑盒提取DNA，利用耐藥基因檢測(cè)試劑盒進(jìn)行聚合酶鏈反應(yīng)（PCR），擴(kuò)增（aac(3)-Ⅰ、aac(3)

3、-Ⅱ、aac(6′)-Ⅰb、aac(6′)-Ⅱ、ant(3″)-Ⅰ、ant(2″)-Ⅰ）6種氨基糖苷類耐藥基因。PCR產(chǎn)物用2.0％瓊脂糖凝膠電泳,出現(xiàn)與陽(yáng)性對(duì)照分子相當(dāng)?shù)哪康臈l帶判斷為陽(yáng)性，照相后保存影像。
　　結(jié)果：
　　1、銅綠假單胞菌藥敏試驗(yàn)結(jié)果
　　對(duì)臨床分離出的142株銅綠假單胞菌進(jìn)行了20種抗生素藥敏試驗(yàn)，結(jié)果顯示：耐藥率最高的抗生素分別為頭孢唑林（97.1%）、頭孢曲松（95.7%）、頭孢呋辛酯（95.

4、7%）、頭孢呋辛鈉（95.1%）、氨芐西林（95.0%）、氨芐西林+舒巴坦（94.3%）、頭孢替坦（94.3%）、復(fù)方新諾明（92.9%）、頭孢哌酮（54.2%）。敏感性最高的抗生素分別為阿米卡星（78.1%）、妥布霉素（71.1%）、哌拉西林+他唑巴坦（64.0%）、頭孢他啶（61.95%）、哌拉西林（56.3%）、美羅培南（56.3%）、左氧氟沙星（53.5%）、環(huán)丙沙星（52.8%）、慶大霉素（44.3%）、亞胺培南（47.1%）

5、。
　　2、氨基糖苷類耐藥基因檢測(cè)結(jié)果
　　對(duì)32株多重耐藥銅綠假單胞菌進(jìn)行耐藥基因檢測(cè)，檢測(cè)出aac(3)-Ⅱ、aac(6′)-Ⅰb和 ant(3″)-Ⅰ氨基糖苷類耐藥基因，陽(yáng)性率分別為（12.5%）、（18.7%）和（9.3%），未檢測(cè)到aac(3)-Ⅰ、aac(6′)-Ⅱ、ant(2″)-Ⅰ基因。
　　結(jié)論：
　　1、2016年保定市分離出的銅綠假單胞菌對(duì)頭孢唑林、頭孢曲松、頭孢呋辛酯、頭孢呋辛鈉、氨芐西林

6、、氨芐西林/舒巴坦、頭孢替坦和復(fù)方新諾明8種抗生素有很高的耐藥率。
　　2、阿米卡星、妥布霉素和慶大霉素三種氨基糖苷類藥物對(duì)銅綠假單胞菌有較高的敏感性，分別為78.1%、71.1%、44.3%，建議臨床優(yōu)先考慮使用。
　　3、檢測(cè)出的多重耐藥銅綠假單胞菌氨基糖苷類耐藥基因以aac(3)-Ⅱ、aac(6′)-Ⅰb和ant(3″)-Ⅰ為主，未檢測(cè)到aac(3)-Ⅰ、ant(2″)-Ⅰ、aac(6′)-Ⅱ基因，說(shuō)明銅綠假單胞菌產(chǎn)生