GSK-3β與TGF-β1-Smad信號(hào)通路在慢性鼻竇炎伴息肉發(fā)病機(jī)制中的初步探討.pdf

1、目的：
　　慢性鼻-鼻竇炎（Chronic Rhinosinusitis，CRS）指鼻腔和鼻竇黏膜的慢性炎癥性疾病，CRS是一種復(fù)雜的炎癥性疾病，臨床分型主要是慢性鼻-鼻竇炎伴鼻息肉（chronic rhinosinusitis with nasal polyps， CRSwNP）和慢性鼻-鼻竇炎不伴鼻息肉（chronic rhinosinusitis without nasal polyps，CRSsNP）兩大類(lèi)。在我國(guó)，隨著環(huán)

2、境問(wèn)題的日益嚴(yán)重CRS發(fā)病率呈明顯上升趨勢(shì)，慢性鼻竇炎的現(xiàn)有治療和患者需求尚存在未滿(mǎn)足的需求，其根本原因在于CRS的疾病機(jī)制不完全明確，因此沒(méi)有更針對(duì)性、更行之有效的治療方案。CRS的機(jī)制研究仍然是目前國(guó)內(nèi)、外耳鼻咽喉科研究的重點(diǎn)。轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1（transforming growth factor-β1, TGF-β1）信號(hào)通路是目前研究較為明確的參與CRS炎癥和息肉相關(guān)的信號(hào)通路。TGF-β1通過(guò)經(jīng)典的Smad受體通路發(fā)揮炎細(xì)胞的

3、趨化因子和炎癥因子釋放過(guò)程，還與細(xì)胞外基質(zhì)（extracellular matrix, ECM）的形成密切相關(guān)。本文通過(guò)研究 GSK-3β在慢性鼻竇炎伴或不伴鼻息肉中的表達(dá)及其與TGF-β1/smad信號(hào)通路的相互作用，來(lái)探討GSK-3β在慢性鼻竇炎伴或不伴鼻息肉發(fā)病過(guò)程中的可能機(jī)制，以便于指導(dǎo)臨床針對(duì)性用藥。
　　方法：
　　1本研究分為兩組：鼻息肉（nasal polyps，NP）組和對(duì)照組。全部標(biāo)本均取自2015年7月

4、-2016年1月河北醫(yī)科大學(xué)第二醫(yī)院耳鼻咽喉科手術(shù)患者。NP組納入患者年齡在18-60歲，標(biāo)本取自慢性鼻-鼻竇炎行鼻息肉摘除術(shù)的患者，術(shù)后病理證實(shí)為鼻息肉。對(duì)照組納入患者年齡18-60歲，標(biāo)本取自患者正常下鼻甲粘膜，對(duì)照組患者均為根據(jù)癥狀、體征及 CT檢測(cè)確診為鼻中隔偏曲或腦脊液鼻漏，排除慢性鼻-鼻竇炎或鼻腔鼻竇的其他疾病，術(shù)前2周均未患有流行性感冒、上呼吸道感染等其他呼吸道相關(guān)癥狀。全部患者術(shù)前4周未使用抗生素、皮質(zhì)類(lèi)固醇激素及抗組胺

5、藥等藥物治療。
　　2 NP組選取術(shù)中取出的息肉組織，對(duì)照組取自患者下鼻甲正常粘膜組織。樣本收集后一份為二，一部分組織即放入4％的多聚甲醛固定液中，常規(guī)脫水，石蠟包埋，用于HE染色和免疫組化后續(xù)實(shí)驗(yàn)。另一部分組織放入滅酶滅菌的EP管中，并立即投入液氮，運(yùn)輸至實(shí)驗(yàn)室液氮罐中超低溫保存以便進(jìn)行后續(xù)PCR實(shí)驗(yàn)。
　　3蠟塊包埋組織切片后部分行HE染色，觀察兩組切片的炎細(xì)胞浸潤(rùn)情況以及毛細(xì)血管數(shù)量。
　　4蠟塊包埋組織切片后部

6、分免疫組化染色，觀察兩組CTGF、Smad4、GSK-3β表達(dá)情況。用IPP（image-pro-plus）6.0圖像分析軟件對(duì)每個(gè)切片的5個(gè)隨機(jī)視野進(jìn)行拍照后進(jìn)行光密度分析，用平均光密度（optical density, OD）對(duì)CTGF、Smad4、GSK-3β表達(dá)量進(jìn)行定量分析。對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。
　　5超低溫保存的組織，提取RNA后進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR方法進(jìn)一步驗(yàn)證標(biāo)本中CTGF、Smad4、GSK-3β基因mR

7、NA的表達(dá)情況。應(yīng)用Light Cycler Data Analysis軟件分析各樣本的目的基因的Ct值，用2-△△Ct法計(jì)算各基因RQ值代表mRNA的表達(dá)。全部數(shù)據(jù)采用軟件SPSS21.0行統(tǒng)計(jì)分析。
　　結(jié)果：
　　1鼻息肉組患者與對(duì)照組患者年齡、性別等一般資料無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
　　2光鏡下分別觀察兩組HE染色切片，息肉組HE染色切片中毛細(xì)血管稀疏，可見(jiàn)炎性細(xì)胞大量浸潤(rùn)；對(duì)照組少量炎性細(xì)胞浸潤(rùn)。
　　3鏡下分別

8、觀察息肉組和對(duì)照組免疫組織化學(xué)染色切片：息肉組棕黃色顆粒明顯增多，且著色深；對(duì)照組棕黃色染色顆粒少，著色淺。用OD值代表CTGF、Smad4和GSK-3β的表達(dá)量，進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，可得：和對(duì)照組相比，息肉組CTGF、Smad4和GSK-3β的表達(dá)明顯升高（tCTGF=3.51， P<0.01；tSmad4=2.22，P=0.04；tGSK-3β=4.95，P<0.01，α=0.05）,其差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　4 RT-PCR分析

9、結(jié)果顯示：和對(duì)照組相比，息肉組CTGF、Smad4和GSK-3β的基因表達(dá)量升高（tCTGF=5.80，P<0.01；tSmad4=2.83，P=0.01；tGSK-3β=2.80，P<0.01，α=0.05）,其差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)論：
　　1息肉組織中炎細(xì)胞浸潤(rùn)明顯，毛細(xì)血管稀疏。
　　2息肉組織中CTGF、Smad4和GSK-3β的蛋白表達(dá)量及基因表達(dá)量明顯升高。
　　3 CTGF、Smad4和GSK