GSK-3β與TGF-β1-Smad信號通路在慢性鼻竇炎伴息肉發(fā)病機制中的初步探討.pdf

1、目的：
　　慢性鼻-鼻竇炎（Chronic Rhinosinusitis，CRS）指鼻腔和鼻竇黏膜的慢性炎癥性疾病，CRS是一種復(fù)雜的炎癥性疾病，臨床分型主要是慢性鼻-鼻竇炎伴鼻息肉（chronic rhinosinusitis with nasal polyps， CRSwNP）和慢性鼻-鼻竇炎不伴鼻息肉（chronic rhinosinusitis without nasal polyps，CRSsNP）兩大類。在我國，隨著環(huán)

2、境問題的日益嚴重CRS發(fā)病率呈明顯上升趨勢，慢性鼻竇炎的現(xiàn)有治療和患者需求尚存在未滿足的需求，其根本原因在于CRS的疾病機制不完全明確，因此沒有更針對性、更行之有效的治療方案。CRS的機制研究仍然是目前國內(nèi)、外耳鼻咽喉科研究的重點。轉(zhuǎn)化生長因子β1（transforming growth factor-β1, TGF-β1）信號通路是目前研究較為明確的參與CRS炎癥和息肉相關(guān)的信號通路。TGF-β1通過經(jīng)典的Smad受體通路發(fā)揮炎細胞的

3、趨化因子和炎癥因子釋放過程，還與細胞外基質(zhì)（extracellular matrix, ECM）的形成密切相關(guān)。本文通過研究 GSK-3β在慢性鼻竇炎伴或不伴鼻息肉中的表達及其與TGF-β1/smad信號通路的相互作用，來探討GSK-3β在慢性鼻竇炎伴或不伴鼻息肉發(fā)病過程中的可能機制，以便于指導(dǎo)臨床針對性用藥。
　　方法：
　　1本研究分為兩組：鼻息肉（nasal polyps，NP）組和對照組。全部標本均取自2015年7月

4、-2016年1月河北醫(yī)科大學第二醫(yī)院耳鼻咽喉科手術(shù)患者。NP組納入患者年齡在18-60歲，標本取自慢性鼻-鼻竇炎行鼻息肉摘除術(shù)的患者，術(shù)后病理證實為鼻息肉。對照組納入患者年齡18-60歲，標本取自患者正常下鼻甲粘膜，對照組患者均為根據(jù)癥狀、體征及 CT檢測確診為鼻中隔偏曲或腦脊液鼻漏，排除慢性鼻-鼻竇炎或鼻腔鼻竇的其他疾病，術(shù)前2周均未患有流行性感冒、上呼吸道感染等其他呼吸道相關(guān)癥狀。全部患者術(shù)前4周未使用抗生素、皮質(zhì)類固醇激素及抗組胺

5、藥等藥物治療。
　　2 NP組選取術(shù)中取出的息肉組織，對照組取自患者下鼻甲正常粘膜組織。樣本收集后一份為二，一部分組織即放入4％的多聚甲醛固定液中，常規(guī)脫水，石蠟包埋，用于HE染色和免疫組化后續(xù)實驗。另一部分組織放入滅酶滅菌的EP管中，并立即投入液氮，運輸至實驗室液氮罐中超低溫保存以便進行后續(xù)PCR實驗。
　　3蠟塊包埋組織切片后部分行HE染色，觀察兩組切片的炎細胞浸潤情況以及毛細血管數(shù)量。
　　4蠟塊包埋組織切片后部

6、分免疫組化染色，觀察兩組CTGF、Smad4、GSK-3β表達情況。用IPP（image-pro-plus）6.0圖像分析軟件對每個切片的5個隨機視野進行拍照后進行光密度分析，用平均光密度（optical density, OD）對CTGF、Smad4、GSK-3β表達量進行定量分析。對數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析。
　　5超低溫保存的組織，提取RNA后進行實時熒光定量RT-PCR方法進一步驗證標本中CTGF、Smad4、GSK-3β基因mR

7、NA的表達情況。應(yīng)用Light Cycler Data Analysis軟件分析各樣本的目的基因的Ct值，用2-△△Ct法計算各基因RQ值代表mRNA的表達。全部數(shù)據(jù)采用軟件SPSS21.0行統(tǒng)計分析。
　　結(jié)果：
　　1鼻息肉組患者與對照組患者年齡、性別等一般資料無統(tǒng)計學差異。
　　2光鏡下分別觀察兩組HE染色切片，息肉組HE染色切片中毛細血管稀疏，可見炎性細胞大量浸潤；對照組少量炎性細胞浸潤。
　　3鏡下分別

8、觀察息肉組和對照組免疫組織化學染色切片：息肉組棕黃色顆粒明顯增多，且著色深；對照組棕黃色染色顆粒少，著色淺。用OD值代表CTGF、Smad4和GSK-3β的表達量，進行統(tǒng)計學分析，可得：和對照組相比，息肉組CTGF、Smad4和GSK-3β的表達明顯升高（tCTGF=3.51， P<0.01；tSmad4=2.22，P=0.04；tGSK-3β=4.95，P<0.01，α=0.05）,其差異有統(tǒng)計學意義。
　　4 RT-PCR分析

9、結(jié)果顯示：和對照組相比，息肉組CTGF、Smad4和GSK-3β的基因表達量升高（tCTGF=5.80，P<0.01；tSmad4=2.83，P=0.01；tGSK-3β=2.80，P<0.01，α=0.05）,其差異有統(tǒng)計學意義。
　　結(jié)論：
　　1息肉組織中炎細胞浸潤明顯，毛細血管稀疏。
　　2息肉組織中CTGF、Smad4和GSK-3β的蛋白表達量及基因表達量明顯升高。
　　3 CTGF、Smad4和GSK