沉默信號(hào)調(diào)節(jié)因子在慢性鼻竇炎伴鼻息肉中的表達(dá).pdf

1、慢性鼻竇炎伴鼻息肉( chronic rhinosinusitis with nasal polyps, CRSwNP)是耳鼻喉科的常見(jiàn)疾病,為鼻-鼻竇黏膜的慢性炎癥性病變,在病理上主要表現(xiàn)為鼻竇和鼻腔粘膜炎性改變,并有水腫。鼻息肉發(fā)病率高,且容易復(fù)發(fā),最新的歐洲鼻竇炎和鼻息肉診療意見(jiàn)書(shū)報(bào)道每年鼻息肉患病率可達(dá)10.9％,雖經(jīng)鼻內(nèi)鏡手術(shù)與局部糖皮質(zhì)激素治療,仍有20%左右復(fù)發(fā),是目前鼻科疾病治療的一大難點(diǎn)。鼻息肉給患者生活、學(xué)習(xí)、工作造

2、成諸多的障礙,給社會(huì)造成嚴(yán)重的影響和沉重的負(fù)擔(dān)。鼻息肉治療和預(yù)防成為亟待解決的一項(xiàng)重大的醫(yī)學(xué)和社會(huì)問(wèn)題。
　　慢性鼻竇炎伴鼻息肉的發(fā)病機(jī)制至今未完全闡明,目前認(rèn)為其發(fā)病原因是局部微環(huán)境中的炎癥性反應(yīng),多種細(xì)胞因子在局部病灶內(nèi)長(zhǎng)期存在并使組織發(fā)生一系列的病理變化。近年來(lái)研究發(fā)現(xiàn)一些內(nèi)源性蛋白或外源性蛋白可通過(guò)病原相關(guān)分子模式受體結(jié)合被免疫細(xì)胞識(shí)別,刺激下游的信號(hào)通路,促進(jìn)炎性因子分泌,從而發(fā)揮了炎癥反應(yīng)。目前,已知的DAMPs家族,

3、如PLUNC和HMGB1。前期,我們研究發(fā)現(xiàn)HMGB1蛋白在鼻息肉組織中較正常鼻黏膜組織中表達(dá)增高,體外脂多糖可以誘導(dǎo)鼻黏膜上皮細(xì)胞細(xì)胞核內(nèi) HMGB1蛋白的主動(dòng)轉(zhuǎn)移和釋放,這提示HMGB1可以從鼻黏膜上皮細(xì)胞內(nèi)被釋放出來(lái),通過(guò)激活其他細(xì)胞參與免疫應(yīng)答或炎癥反應(yīng),從而參與鼻息肉的慢性炎癥過(guò)程。但HMGB1蛋白從細(xì)胞核內(nèi)向細(xì)胞質(zhì)的移位和釋放的調(diào)節(jié)機(jī)制尚未闡明。Scaffidi等人研究發(fā)現(xiàn),乙?；富钚栽鰪?qiáng)會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞核內(nèi)HMGB1高乙?；?

4、從而引起HMGB1釋放至細(xì)胞質(zhì)內(nèi),然后以分泌性溶酶體為載體,將HMGB1分泌到胞外,進(jìn)而參與炎癥的發(fā)生。根據(jù)以上的理論,我們將從具有去乙酰化作用的沉默信息調(diào)節(jié)因子入手,了解其在鼻黏膜組織中的表達(dá)和作用,初步探討沉默信息調(diào)節(jié)因子參與調(diào)節(jié)HMGB1蛋白功能。沉默信息調(diào)節(jié)因子( silent information regulator2, Sir2)是依賴于煙酰胺腺嘌呤二核苷酸的第三類組蛋白去乙酰化酶。新近Nature等文獻(xiàn)報(bào)道沉默信號(hào)調(diào)節(jié)因

5、子中Sirtuins蛋白家族是參與調(diào)控衰老、氧化應(yīng)激和炎癥機(jī)制的上游信號(hào)通路,在呼吸道上皮細(xì)胞中病原感染和細(xì)胞衰老中起至關(guān)重要的作用。鼻息肉的發(fā)病機(jī)制中可能也存在經(jīng)Sirtuins信號(hào)傳導(dǎo)通路的干預(yù)和調(diào)控。本研究通過(guò)檢測(cè)鼻息肉組織中沉默信號(hào)調(diào)節(jié)因子1和2(Sirt1,2)的陽(yáng)性率和陽(yáng)性細(xì)胞數(shù),闡明從組織細(xì)胞水平上找到鼻息肉和正常鼻黏膜組織的區(qū)別;通過(guò)體外鼻黏膜上皮細(xì)胞培養(yǎng),觀察Sirt6在上皮細(xì)胞中的功能,從而深入探討他們?cè)诒窍⑷獍l(fā)病中

6、的作用,為進(jìn)一步改善其預(yù)防和治療水平提供理論依據(jù)。
　　第一部分 Sirt1和Sirt2在慢性鼻竇炎伴鼻息肉中的表達(dá)
　　目的:研究Sirt1和Sirt2在慢性鼻竇炎伴鼻息肉中的表達(dá)水平,以探討其在鼻息肉形成過(guò)程中發(fā)揮的作用。
　　方法:收集鼻息肉組織38例和正常鼻黏膜組織8例,分別進(jìn)行 Western blot和組織切片免疫組化檢測(cè)總Sirt1和Sirt2蛋白表達(dá)及其在細(xì)胞質(zhì)、細(xì)胞核分布。
　　結(jié)果:1.免疫組

7、化顯示Sirt1主要分布在正常鼻黏膜中腺體細(xì)胞內(nèi),鼻息肉組織中主要分布在浸潤(rùn)的炎性細(xì)胞內(nèi),腺體細(xì)胞中未見(jiàn)或少見(jiàn)其表達(dá);Sirt2主要分布在上皮細(xì)胞漿內(nèi),正常對(duì)照組明顯高于鼻息肉組。2. Western blot顯示正常對(duì)照組的Sirt1和Sirt2蛋白水平明顯高于鼻息肉組(P值均小于0.01)。
　　結(jié)論:正常鼻黏膜中有一定量Sirt1和Sirt2表達(dá),其表達(dá)降低可能參與了慢性鼻竇炎伴鼻息肉的形成和炎性反應(yīng)過(guò)程。
　　第二部

8、分 RNA干擾抑制Sirt6基因表達(dá)對(duì)鼻黏膜上皮細(xì)胞纖毛分化和HMGB1表達(dá)的影響
　　目的:觀察siRNA Sirt6對(duì)鼻黏膜上皮細(xì)胞纖毛分化和HMGB1表達(dá)的影響。
　　方法:脂質(zhì)體介導(dǎo)的siRNA Sirt6轉(zhuǎn)染原代培養(yǎng)的鼻息肉上皮細(xì)胞后,Western blot檢測(cè)鼻黏膜上皮細(xì)胞中 HMGB1和 Sirt6蛋白的表達(dá);熒光顯微鏡下觀察Sirt6下調(diào)后HMGB1蛋白在細(xì)胞中的分布以及纖毛的改變。
　　結(jié)果:與未轉(zhuǎn)

9、染組比較,siRNA Sirt6轉(zhuǎn)染原代培養(yǎng)的鼻息肉上皮細(xì)胞1d,2d和3d后,Western blot法檢測(cè)鼻黏膜上皮細(xì)胞中Sirt6有高的下調(diào)效應(yīng),細(xì)胞免疫熒光法顯示HMGB1蛋白從胞核向胞漿移位,并且上皮細(xì)胞形態(tài)改變,纖毛數(shù)量隨時(shí)間延長(zhǎng)明顯減少。
　　結(jié)論:質(zhì)體介導(dǎo)的siRNA Sirt6轉(zhuǎn)染原代培養(yǎng)的鼻黏膜上皮細(xì)胞,能夠下調(diào)細(xì)胞中Sirt6表達(dá),誘導(dǎo)HMGB1的移位和釋放,纖毛數(shù)量減少,提示Sirt6蛋白在鼻黏膜上皮細(xì)胞的