PI3K-Akt-HIF-1α通路和局部變應(yīng)性炎癥在慢性鼻-鼻竇炎伴息肉發(fā)病機(jī)制中的作用研究.pdf

1、第一部分 PI3K/Akt/HIF-1α通路和IL-17A在慢性鼻-鼻竇炎伴息肉發(fā)病機(jī)制中的作用研究
　　目的:
　　慢性鼻-鼻竇炎(chronic rhinosinusitis，CRS)根據(jù)有無(wú)鼻息肉，可分為兩大類(lèi):CRS伴息肉(chronic rhinosinusitis with nasal polyps，CRSwNP)和CRS不伴息肉(chronic rhinosinusitis without nasal poly

2、ps，CRSsNP)。CRSwNP的發(fā)病機(jī)制還未完全闡明。根據(jù)浸潤(rùn)的炎癥細(xì)胞類(lèi)型，CRSwNP又可分為兩種亞型:嗜酸粒細(xì)胞性和非嗜酸粒細(xì)胞性。我國(guó)CRSwNP具有獨(dú)特的病因和表型，和缺氧、中性粒細(xì)胞性炎癥以及Th17細(xì)胞關(guān)系密切。本研究探究磷脂酰肌醇-3-羥基酶(phosphoinositide3-kinase，PI3K)/蛋白激酶B(protein kinase B，Akt)/缺氧誘導(dǎo)因子-1α(hypoxia-inducible f

3、actor-1α，HIF-1α)通路以及白介素（interleukin，IL）-17A在這一疾病中的作用。
　　方法:
　　(1)本研究包括53例CRSwNP患者和17例鼻竇囊腫手術(shù)患者作為對(duì)照。(2)行血清吸入物變應(yīng)原篩查試驗(yàn)Phadiatop，采用UniCAP100系統(tǒng)檢測(cè)血清總IgE和嗜酸粒細(xì)胞陽(yáng)離子蛋白(eosinophil cationic protein，ECP)水平。(3)采用酶聯(lián)免疫吸附法(enzyme-li

4、nked immunosorbent assay, ELISA)檢測(cè)鼻組織勻漿上清液中總IgE和ECP的水平。(4)采用生化法檢測(cè)鼻組織中髓過(guò)氧化物酶(myeloperoxidase，MPO)的酶活力。(5)采用免疫印跡(western blotting，WB)法檢測(cè)鼻組織中HIF-1α、磷酸化-Akt（phosphorylated-Akt，p-Akt）和PI3K蛋白的表達(dá)。(6)采用實(shí)時(shí)逆轉(zhuǎn)錄定量聚合酶鏈反應(yīng)(real-time qu

5、antitative reverse transcription polymerase chainreaction，RT2-PCR)法檢測(cè)鼻組織中HIF-1αmRNA和IL-17A mRNA的表達(dá)水平。(7)根據(jù)Lund-MacKay評(píng)分，對(duì)CRSwNP患者鼻竇CT進(jìn)行評(píng)分。(8)取5例CRSwNP患者鼻息肉成纖維細(xì)胞行體外培養(yǎng)，經(jīng)TNF-α刺激和PI3K抑制劑Wortmannin抑制，ELISA法檢測(cè)IL-17A水平;WB法檢測(cè)PI3

6、K、p-Akt和HIF-1α蛋白的表達(dá);RT2-PCR檢測(cè)HIF-1僅mRNA和IL-17A mRNA的表達(dá)水平。
　　結(jié)果:
　　(1)根據(jù)吸入物變應(yīng)原篩查試驗(yàn)Phadiatop的結(jié)果，CRSwNP患者中有6例呈陽(yáng)性，對(duì)照組均為陰性。(2)和對(duì)照組比較，CRSwNP組血清和組織勻漿上清液ECP和總IgE水平無(wú)明顯升高。(3)和對(duì)照組比較，CRSwNP組鼻息肉中MPO酶活力顯著升高。(4)和對(duì)照組比較，CRSwNP組鼻息肉中

7、HIF-1α蛋白水平無(wú)明顯升高。(5)和對(duì)照組比較，CRSwNP組鼻息肉中PI3K、p-Akt蛋白、HIF-1αmRNA和IL-17A mRNA水平顯著升高。(6)在CRSwNP組中，HIF-1α、PI3K、p-Akt水平存在明顯正相關(guān);血清和組織中總IgE水平呈正相關(guān)。(7) CRSwNP患者鼻竇CT評(píng)分和血清總IgE水平有一定相關(guān)性，和其余各指標(biāo)無(wú)明顯相關(guān)性。(8)鼻息肉成纖維細(xì)胞經(jīng)過(guò)TNF-α刺激，HIF-1α、PI3K、p-Ak

8、t、IL-17A水平顯著升高;經(jīng)過(guò)Wortmannin抑制，HIF-1α、PI3K、p-Akt、IL-17A水平顯著下降。
　　結(jié)論:
　　本研究中CRSwNP主要表現(xiàn)為中性粒細(xì)胞性炎癥。全身變應(yīng)性因素在CRSwNP發(fā)病中有一定作用。PI3 K/Akt/HIF-1α通路在CRSwNP發(fā)病中有一定作用。本研究表明IL-17A在CRSwNP發(fā)病中有一定作用，其水平受PI3K/Akt/HIF-1α通路調(diào)節(jié)。IL-17A升高是非嗜酸

9、粒細(xì)胞性CRSwNP中性粒細(xì)胞性炎癥的主要原因之一。PI3K/Akt/HIF-1α通路和Th17/IL-17A可能是今后治療CRSwNP的新靶點(diǎn)。
　　第二部分局部變應(yīng)性炎癥和金葡菌腸毒素超抗原在慢性鼻-鼻竇炎伴患肉發(fā)病機(jī)制中的作用研究
　　目的:
　　慢性鼻-鼻竇炎伴息肉(chronic rhinosinusitis with nasal polyps，CRSwNP)是一種多病因的疾病，是鼻腔、鼻竇長(zhǎng)期炎癥的結(jié)果，其

10、發(fā)病機(jī)制并未完全闡明。局部變應(yīng)性炎癥在慢性鼻炎的發(fā)病中起到一定作用，但在CRSwNP中的作用不明。金黃色葡萄球菌腸毒素（staphylococcus aureus enterotoxins，SEs）在CRSwNP發(fā)病中多以超抗原形式發(fā)揮作用，但這一結(jié)果還有爭(zhēng)議，并且在中西方人群中存在著明顯差異。局部變應(yīng)性炎癥和SEs均可引起鼻腔局部的特異性IgE(specific IgE，sIgE)升高。本研究旨在研究局部變應(yīng)性炎癥和SE在CRSwNP

11、發(fā)病中的作用。
　　方法:
　　(1)本研究共包括18例2014.10～2014.11在我院行功能性鼻內(nèi)窺鏡手術(shù)的CRSwNP患者為實(shí)驗(yàn)組，6例鼻竇囊腫手術(shù)患者為對(duì)照組。(2)取患者外周血行吸入物變應(yīng)原篩查Phadiatop，UniCAP100系統(tǒng)行總IgE和嗜酸粒細(xì)胞陽(yáng)離子蛋白(eosinophil cationic protein，ECP)檢測(cè)。(3)取實(shí)驗(yàn)組鼻息肉組織和對(duì)照組鼻組織，勻漿后取組織勻漿上清液，行吸入物變應(yīng)

12、原篩查Phadiatop; UniCAP100系統(tǒng)行總IgE、ECP、金黃色葡萄球菌腸毒素A(SEA)-sIgE和金黃色葡萄球菌腸毒素B(SEB)-sIgE檢測(cè);ELISA法行SEA、SEB、髓過(guò)氧化物酶(Myeloperoxidase，MPO)檢測(cè)。(4)根據(jù)病理HE染色中嗜酸粒細(xì)胞比例將CRSwNP分為嗜酸粒細(xì)胞性和非嗜酸粒細(xì)胞性。(5)根據(jù)Lund-MacKay評(píng)分，對(duì)實(shí)驗(yàn)組CRSwNP患者鼻竇CT進(jìn)行評(píng)分。
　　結(jié)果:

13、r>　　(1)18例CRSwNP患者中3例外周血Phadiatop陽(yáng)性，總IgE和ECP水平較對(duì)照組無(wú)明顯差異。(2)實(shí)驗(yàn)組中除3例系統(tǒng)性過(guò)敏患者外，另有2例組織勻漿上清液中Phadiatop陽(yáng)性。(3)和對(duì)照組比較，實(shí)驗(yàn)組組織勻漿上清液中SEA、SEB水平升高，但SEA-sIgE、SEB-sIgE均陰性。和對(duì)照組比較，實(shí)驗(yàn)組組織勻漿上清液中總IgE無(wú)升高，ECP和MPO均升高。(4)18例CRSwNP中13例為非嗜酸粒細(xì)胞性CRSwN

14、P，5例為嗜酸粒細(xì)胞性CRSwNP。(5) CRSwNP患者中，血清和鼻組織勻漿上清液中ECP水平呈明顯的正相關(guān);血清和鼻組織勻漿上清液中總IgE水平呈明顯的正相關(guān)。(6) CRSwNP患者鼻竇CT評(píng)分和其他各指標(biāo)均無(wú)明顯相關(guān)性。
　　結(jié)論:
　　(1)全身變應(yīng)性因素在CRSwNP發(fā)病中有一定作用。(2)本研究中CRSwNP主要為非嗜酸粒細(xì)胞性CRSwNP，表現(xiàn)為中性粒細(xì)胞性炎癥。(3)局部變應(yīng)性炎癥在CRSwNP中發(fā)揮一定