金蟬花多糖的結(jié)構(gòu)特征及免疫活性初步研究.pdf

1、金蟬花(Cordyceps cicadae)是麥角菌科真菌大蟬草寄生在山蟬幼蟲上形成的復(fù)合物，性寒味甘，具有疏風(fēng)散熱之功效，是一種藥食兩用真菌，亦是我國傳統(tǒng)名貴中藥材之一。近代許多學(xué)者對金蟬花的藥理活性進(jìn)行了廣泛研究，發(fā)現(xiàn)蟬花具有保護(hù)腎功能、延緩慢性腎功能衰竭的作用，還具有抗腫瘤、調(diào)節(jié)免疫功能等生物活性。金蟬花的活性成分主要包括多糖、核苷、蟲草素、甘露醇、麥角甾醇等，現(xiàn)代藥理研究表明，多糖作為其主要有效成分之一，具有明顯的免疫調(diào)節(jié)、改善

2、腎功能等作用，因此成為近年來研究和開發(fā)的熱點(diǎn)。本論文通過本課題組前期已優(yōu)化的提取條件，分別獲得50％醇沉金蟬花多糖(CP50)和80%醇沉金蟬花多糖(CP80)，采用體外抗氧化活性體系篩選出活性較高的粗多糖，利用 DEAE-52纖維素離子交換柱和Sephadex G-100葡聚糖凝膠柱等現(xiàn)代分離手段獲得純度均一的多糖組分，并對其結(jié)構(gòu)特征以及免疫活性進(jìn)行初步研究，為金蟬花多糖用于保健食品和醫(yī)藥產(chǎn)品的開發(fā)提供理論依據(jù)。
　　主要研究內(nèi)

3、容如下：
　　1.金蟬花多糖的抗氧化活性研究。采用熱水浸提、不同濃度乙醇分級沉淀的方法從金蟬花中提取多糖，分別獲得50%醇沉金蟬花多糖（CP50）和80%醇沉金蟬花多糖（CP80），并檢測兩者的體外抗氧化活性。結(jié)果表明，CP50和CP80均具有良好的抗氧化能力，且存在明顯的量效關(guān)系。當(dāng)多糖質(zhì)量濃度達(dá)到0.8 mg/mL時(shí)，對 DPPH自由基和? OH自由基的清除率 CP50分別為79.16%、94.12%，CP80分別為58.73

4、%、57.9%，表明CP50的抗氧化活性顯著高于CP80，更適合開發(fā)為抗氧化劑。
　　2.金蟬花多糖的分離純化及理化性質(zhì)研究。金蟬花多糖CP50經(jīng) DEAE-52纖維素離子交換柱和Sphadex G-100葡聚糖凝膠柱分離純化，得到CPA-1和CPB-1兩個(gè)多糖組分。采用紫外全波長掃描和高效液相色譜法檢測兩者的純度，結(jié)果表明，CPA-1和CPB-1都是純度均一的多糖組分，兩者的分子量分別為28.2kD和11.9kD。理化性質(zhì)結(jié)果表

5、明，CPA-1和 CPB-1均為白色絮狀固體；無味，均易溶于水，不溶于乙醇、氯仿等有機(jī)溶劑；兩者均不含淀粉、蛋白質(zhì)和氨基酸。
　　3.金蟬花多糖CPA-1和CPB-1的結(jié)構(gòu)特征初步研究。運(yùn)用GC、高碘酸氧化、Smith降解結(jié)合IR、CD、NMR等分析方法對金蟬花多糖組分CPA-1和CPB-1的單糖組成、糖鏈結(jié)構(gòu)和多糖溶液構(gòu)象進(jìn)行解析。GC結(jié)果表明，CPA-1和CPB-1中均含有葡萄糖、甘露糖和半乳糖，其摩爾比分別為：1:0.479

6、:0.615、1:0.14:0.114；硫酸咔唑法測得CPA-1和CPB-1的糖醛酸含量分別為0.956%和1.87%；采用苯酚-硫酸法測定CPA-1和CPB-1兩個(gè)多糖組分的糖含量，得出CPA-1含糖量為82.3%， CPB-1含糖量為79.2%；紅外掃描顯示兩個(gè)組分均具有多糖的典型特征吸收峰；1H NMR表明CPA-1和CPB-1主要由β構(gòu)型糖苷鍵連接，同時(shí)也含有α構(gòu)型糖苷鍵；高碘酸氧化和Smith降解分析初步推測，CPA-1中甘露

7、糖、葡萄糖和半乳糖主要是以1→3位糖苷鍵連接的，此外可能還含有少量的1→2、1→4或1→6連接鍵型；CPB-1中葡萄糖主要由1→3鍵位連接，半乳糖和甘露糖主要是由1→2、1→4鍵位連接，還有少量的1→6連接鍵。CD結(jié)果表明外界條件的變化可影響CPA-1和CPB-1多糖分子的不對稱性及其多糖溶液構(gòu)象；剛果紅實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，CPA-1和CPB-1均具有三股螺旋結(jié)構(gòu)。
　　4.金蟬花多糖的免疫活性初步研究。通過體外實(shí)驗(yàn)研究金蟬花多糖CPA-1

8、和CPB-1對DC表型和功能的影響，為進(jìn)一步闡明金蟬花多糖的免疫調(diào)節(jié)機(jī)制提供基礎(chǔ)。實(shí)驗(yàn)分為陰性對照組（RPMI-1640培養(yǎng)基）和藥物處理組，觀察經(jīng)金蟬花多糖組分CPA-1和CPB-1作用后樹突狀細(xì)胞的數(shù)量和形態(tài)變化，以及DC表面分子CD80/86、CD11c和MHC-Ⅱ類分子的表達(dá)情況。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，在200μg/mL金蟬花多糖組分干預(yù)濃度范圍內(nèi)，DC數(shù)量和對照組的細(xì)胞數(shù)量無顯著差異；但經(jīng)金蟬花多糖作用后，DC表面伸出多個(gè)長短不一的毛刺樣