首烏藤多糖分離純化、初步結(jié)構(gòu)分析及免疫活性研究.pdf

1、　　目的：研究首烏藤粗多糖對小鼠免疫功能的影響,選擇合適的方法對提取的粗多糖進(jìn)行分離純化,利用化學(xué)方法、現(xiàn)代波譜及色譜技術(shù)對所獲得的均一多糖進(jìn)行化學(xué)結(jié)構(gòu)的初步研究,以期為首烏藤多糖的開發(fā)利用和臨床應(yīng)用提供技術(shù)方法和科學(xué)依據(jù)。
　　方法：(1)采用正常小鼠模型和腹腔注射環(huán)磷酰胺所致的小鼠免疫抑制模型,以生理鹽水為空白對照組,香菇多糖片為陽性對照組,灌服首烏藤多糖,觀察對小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬功能的影響及溶血素和溶血空斑形成的影響；(

2、2)采用95%乙醇回流提取除去脂溶性小分子物質(zhì),然后沸水提取、醇沉和真空干燥得首烏藤粗多糖,經(jīng)乙醇分級醇沉,15%三氯乙酸脫蛋白,透析處理后,進(jìn)一步用DEAE 52-纖維素陰離子交換柱層析和Sephacryl S-300凝膠過濾柱層析進(jìn)行分離純化；(3)采用化學(xué)分析方法對所得到的首烏藤均一多糖樣品進(jìn)行理化性質(zhì)分析,并通過高效凝膠滲透色譜(HPGPC)、氣相色譜(GC)、紫外光譜(UV)及紅外光譜(IR)等方法對樣品進(jìn)行純度鑒定、分子量測

3、定、單糖組成及初步結(jié)構(gòu)分析。
　　結(jié)果：(1)與空白對照組相比,首烏藤多糖組可顯著提高正常小鼠和免疫抑制小鼠腹腔巨噬細(xì)胞對雞紅細(xì)胞的吞噬百分率和吞噬指數(shù),促進(jìn)溶血素和溶血空斑的形成,其中以0.2 g/kg首烏藤多糖劑量組作用為最佳；(2)DEAE 52-纖維素柱分離純化得到3個首烏藤多糖組分,即SWTPA、SWTPB和SWTPC,Sephacryl S-300凝膠柱進(jìn)一步分離純化得到 6 個首烏藤多糖組分,將其分別命名為 SWT

4、PA-1、SWTPB-1、SWTPB-2、SWTPB-3、SWTPC-1和SWTPC-2；(3)經(jīng)常壓凝膠柱色譜法和高效液相凝膠色譜法確定 6 個樣品均為均一組分,理化性質(zhì)顯示均為白色絮狀粉末,純度較高,不含有淀粉、酚類化合物、大分子的多肽、蛋白質(zhì)和核酸,除SWTPA-1、SWTPC-1和SWTPC-2外,樣品中均含有糖醛酸類化合物,6個多糖樣品分子量分別為9162、56314、44502、37278、40558和61000。氣相色譜法

5、測定樣品的單糖組成,顯示均是由不同糖殘基構(gòu)成的雜多糖,以阿拉伯糖和半乳糖為主要組成成分,紫外光譜顯示樣品在260 nm和280 nm處均未見蛋白質(zhì)、多肽和核酸的特征吸收峰,經(jīng)紅外光譜測定 6 種多糖樣品均具有多糖類物質(zhì)的特征吸收峰。
　　結(jié)論：藥理實驗研究表明首烏藤多糖具有明顯的免疫增強作用,值得深入研究；摸索出了一套適合首烏藤多糖的分離純化方法且有效實用；對分離得到的 6種均一多糖組分進(jìn)行結(jié)構(gòu)的初步分析,為首烏藤多糖的進(jìn)一步開