蒲公英多糖結(jié)構(gòu)及活性研究.pdf

1、目的:篩選蒲公英多糖抗氧化和抗菌活性部位，探討生物活性與蒲公英多糖分子量的關(guān)系，并研究蒲公英中活性多糖的結(jié)構(gòu)。
　　方法:（1）蒲公英多糖提取分離：采用熱水提取和乙醇沉淀的提取方法獲得蒲公英總多糖，并采用正交試驗設(shè)計對其提取方法進(jìn)行優(yōu)化，得到蒲公英總多糖后進(jìn)行采用三氯乙酸法除去多糖中的蛋白，脫蛋白后的多糖經(jīng)膜分離得到7個組分，濾膜的分子量截留值分別為6 kDa、10 kDa、20 kDa、50 kDa、100 kDa和150 kD

2、a；（2）蒲公英多糖抗氧化和抗菌活性研究：抗氧化活性研究主要是考察蒲公英多糖對 DPPH、超氧自由基及羥基自由基清除率；抗菌活性研究主要是考察蒲公英多糖對大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、綠膿桿菌和枯草芽孢桿菌的抑菌作用；（3）經(jīng)篩選后的蒲公英多糖分別經(jīng) DEAE-Cellulose52纖維素柱和Sephadex G-100色譜柱純化。（4）采用高效凝膠滲透色譜法測定多糖的純度和分子量；采用高效液相、高碘酸氧化、Smith降解、甲基化、氣質(zhì)聯(lián)用

3、色譜法、紅外光譜法研究蒲公英均一多糖結(jié)構(gòu)。
　　結(jié)果:（1）通過正交試驗所得蒲公英多糖最佳提取工藝為：液比為1:30，提取次數(shù)為3次，提取溫度為90℃，提取時間為1 h。最佳條件下提取得到蒲公英總多糖（TMP），多糖提取率為10.32％，蛋白含量下降了0.9%。膜分離得到7部分不同分子量范圍的蒲公英多糖（<6 kDa、6~10 kDa、10~20 kDa、20~50 kDa、50~100 kDa、100~150 kDa和>150

4、kDa），分別命名為 TMP-A，TMP-B，TMP-C，TMP-D，TMP-E， TMP-F， TMP-G，所占總糖比例分別為41.6%，2.7%，2.4%，13.2%、3.0%、21.9%和15.2%，各部分多糖含量分別為38%、39%、30%、29%、23%、26%和9%。（2）7組不同分子量蒲公英多糖經(jīng)體外抗氧化與體外抗菌活性研究篩選出2組蒲公英多糖 TMP-A（<6 kDa）、TMP-D（20~50 kDa）。（3）經(jīng) DEA

5、E- Cellulose52和Sephadex G-100分離純化后得2個蒲公英均一多糖，分別命名為 TMP-A0.a、TMP-D0.a；兩個均一蒲公英多糖分子量別為5.21×103 Da和4.97×104 Da，水解反應(yīng)顯示這兩個多糖均由甘露糖、鼠李糖、葡萄糖醛酸、半乳糖醛酸和葡萄糖組成，但單糖摩爾比各不相同，進(jìn)一步采用高碘酸氧化、Smith降解、甲基化分析、氣質(zhì)聯(lián)用色譜法對其結(jié)構(gòu)進(jìn)行解析，結(jié)果顯示：TMP-A0.a主鏈由(1→6)連

6、接的Glcp構(gòu)成，末端殘基為Rhap和GlcpA。TMP-D0.a主鏈由(1→2)-連接的 Glcp和(1→4)連接的 Glcp構(gòu)成，末端殘基為Rhap和GlcpA。TMP-A0.a和TMP-D0.a中均有α和β兩種糖苷鍵。
　　結(jié)論:（1）蒲公英多糖具有較好的體外抗氧化及抗菌活性，且不同分子量級的蒲公英多糖活性不同。（2）從不同分子量蒲公英多糖中篩選出活性部位，經(jīng)分離純化得到2個蒲公英均一多糖，并對其進(jìn)行結(jié)構(gòu)解析。結(jié)果顯示2個蒲