直接腎素抑制劑阿利吉侖抑制腎間質(zhì)纖維化小鼠上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化的作用及其機制.pdf

1、目的：探討直接腎素抑制劑(direct renin inhibitor，DRI)阿利吉侖(aliskiren)對單側(cè)輸尿管結(jié)扎(unilateral ureteral occlusion，UUO)導(dǎo)致的小鼠腎間質(zhì)纖維化中上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化(epithelial mesenchymal transition，EMT)的調(diào)節(jié)作用，同時測定阿利吉侖對血管緊張素Ⅱ(angiotensinⅡ，AngⅡ)、血清應(yīng)答因子(serum-response f

2、actor，SRF)以及血管緊張素受體1(angiotensinreceptor，AT1)表達程度的影響，從而闡明阿利吉侖抑制腎間質(zhì)纖維化小鼠上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化的可能作用機制。
　　方法：24只雄性ICR小鼠隨機分為假手術(shù)組、模型組和阿利吉侖藥物干預(yù)組，每組8只，適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后，應(yīng)用單側(cè)輸尿管結(jié)扎的方法建立小鼠腎間質(zhì)纖維化模型，術(shù)前1天藥物干預(yù)組按25mg/(kg·d)給予阿利吉侖腹腔注射，其余兩組則按等劑量于手術(shù)后每天給予生理鹽水

3、腹腔注射。3組小鼠均于術(shù)后14天處死。留取手術(shù)側(cè)病變腎組織，HE染色觀察小鼠腎組織的病理變化;Masson染色觀察小鼠腎組織中膠原蛋白的表達情況;免疫組織化學(xué)染色法觀察胞漿內(nèi)呈棕黃色的α-平滑肌肌動蛋白(α-smooth muscle actin，α-SMA)的表達情況;免疫印跡法檢測E-鈣粘蛋白(E-cadherin，E-cad)、α-SMA、Ⅰ型膠原(collagenⅠ，ColⅠ)、AngⅡ、SRF、AT1的表達情況。
　　結(jié)

4、果：采用單側(cè)輸尿管結(jié)扎的方法成功制作腎間質(zhì)纖維化小鼠模型，HE染色、Masson染色顯示假手術(shù)組腎臟的病理改變不明顯，而阿利吉侖藥物干預(yù)組小鼠腎間質(zhì)纖維化程度較模型組相比明顯降低，膠原蛋白表達明顯減少。免疫組織化學(xué)染色可見假手術(shù)組腎小管α-SMA陽性顯色較少，模型組小鼠腎小管間質(zhì)纖維化區(qū)域胞漿內(nèi)α-SMA陽性顯色明顯增多，而阿利吉侖藥物干預(yù)組α-SMA陽性顯色較模型組相比明顯減少。免疫印跡法顯示模型組α-SMA、Ⅰ型膠原表達增多，分別是

5、假手術(shù)組的1.79倍、1.95倍，E-cad表達減少，是假手術(shù)組的37.23％，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05);而給予阿利吉侖藥物干預(yù)后，α-SMA蛋白、Ⅰ型膠原表達減少，E-cad表達增多，分別是模型組的63.72％、65.54％和2.1倍，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。同時使用免疫印跡法檢測AngⅡ、AT1、SRF的表達情況，顯示模型組AngⅡ、AT1、SRF呈強陽性表達，分別是是假手術(shù)組的1.56倍、1.77倍、1.67倍