cRGD修飾的載阿霉素酸敏感膠束的構建及抗腫瘤研究.pdf

1、目的：
　　本文旨在構建集智能、高效、低毒為一體的cRGD修飾的、生物可降解酸敏感膠束給藥系統，以期實現阿霉素在腫瘤新生血管和腫瘤細胞內的遞送及藥物的快速釋放。同時，對所制備的膠束的體外及體內抗腫瘤效果進行考察。
　　方法：
　　本文通過開環(huán)聚合反應合成生物可降解的兩親性嵌段共聚物PEG-PTMBPEC，通過酰胺反應將cRGD連接到PEG-PTMBPEC末端。采用氫譜（1H NMR）對合成的聚合物材料進行表征。通過透析

2、法制備了空白膠束和載藥膠束。通過動態(tài)光散射（DLS）、透射電鏡（TEM）及熒光分光光度計對膠束的粒徑、電位、PDI、形態(tài)、載藥量及包封率進行表征。以αvβ3受體過度表達的黑色素瘤細胞（B16）及人臍靜脈內皮細胞（HUVEC）為主要的模型細胞?？瞻啄z束的毒性，cRGD多肽的最佳配體密度及各種處方膠束的IC50值是通過MTT法測定的。在細胞攝取實驗部分，通過激光共聚焦（CLSM）及流式細胞儀對膠束的攝取情況進行定性及定量的分析。通過不同的抑

3、制劑對未經 cRGD修飾的膠束（NT-micelle）及多肽修飾的膠束（cRGD-micelle）的攝取的抑制情況來考察膠束的攝取機制。CLSM進一步驗證膠束在細胞內的pH敏感性。膠束的體內抗腫瘤實驗是在B16荷瘤小鼠的體內進行的。采用HE染色法考察膠束對小鼠的心臟毒性。
　　結果：
　　1H NMR結果顯示，所合成的PEG-PTMBPEC的純度為80.3％，cRGD的連接效率為82.3%。所制備的膠束粒徑在153-181

4、nm之間，PDI均小于0.3。膠束的載藥量接近10%，包封率近60%。TEM電鏡圖顯示，所制備的膠束形態(tài)圓整且分布均勻，同時在血清中具有良好的穩(wěn)定性。膠束的體外釋放呈現明顯的pH依賴性。空白膠束對正常細胞及腫瘤細胞均無毒，表明空白載體具有良好的生物相容性。主動靶向膠束的IC50值比未經修飾的膠束低1.82（B16）及1.78（HUVEC）倍。細胞對cRGD-micelle的攝取顯著高于NT-micelle。膠束通過多種途徑進入細胞，其中

5、以網格蛋白介導的內吞途徑為主。CLSM結果顯示，細胞內溶酶體的酸性環(huán)境可觸發(fā)膠束的pH敏感性，使藥物在細胞內可快速釋放。體內實驗結果顯示，膠束組的小鼠即使在15 mg/kg的給藥劑量下，仍無明顯的毒副作用。同時，cRGD-micelle比NT-micelle表現出更強的抑瘤效果。HE染色實驗結果顯示，膠束在高劑量的給藥條件下對心臟無毒。
　　結論：
　　本文成功制備了cRGD修飾的酸敏感載阿霉素的膠束。所制備的膠束粒徑均一，