基于DNA生物材料的阿霉素納米載體構(gòu)建及其抗腫瘤作用研究.pdf

1、藥物治療一直是遏制惡性腫瘤最有效的方法之一，而藥物傳遞系統(tǒng)則是惡性腫瘤和藥物之間的紐帶，藥物可以通過藥物傳遞系統(tǒng)的優(yōu)化從而達(dá)到更好的治療效用。而基于DNA生物材料的納米藥物載體是近來的熱點(diǎn)研究之一，它利用材料的特殊性能，實現(xiàn)了目前普通藥物傳遞系統(tǒng)所不能達(dá)到的功能和用途。蒽環(huán)類抗腫瘤藥物阿霉素能夠嵌入到DNA雙鏈結(jié)構(gòu)中去，并且能形成穩(wěn)定的復(fù)合物，本研究選用不同的陽離子聚合物RLT、CTAB、PEI來優(yōu)化修飾雙鏈DNA材料，得到更為理想的雙

2、鏈DNA-聚合物納米復(fù)合體作為遞藥系統(tǒng)，從而提高對腫瘤細(xì)胞的抗腫瘤作用。
　　研究目的:
　　通過不同種類的陽離子聚合物結(jié)合雙鏈DNA材料來構(gòu)建納米藥物載體，以及比較在體外表征和細(xì)胞學(xué)作用的優(yōu)劣，選定出構(gòu)建藥物傳遞系統(tǒng)的材料和方法，提高阿霉素的抗腫瘤效果。
　　研究方法:
　　本研究首先制備性質(zhì)穩(wěn)定，能夠長期保存的雙鏈M13mp18RFⅠDNA作為載體構(gòu)建材料;采用陽離子聚合物RLT、CTAB、PEI修飾雙鏈M1

3、3mp18RFⅠDNA，從而構(gòu)建出DOX/DNA-RLT、DOX/DNA-CTAB、DOX/DNA-PEI的阿霉素納米載體;激光納米粒度儀測定其粒徑和電位;透射電子顯微鏡考察其形態(tài)及分散均勻度;超濾離心法考察其藥物包載率;透析法考察其釋藥效率;MTT法考察其對不同種類腫瘤細(xì)胞的增殖抑制效果，并評價材料對腫瘤細(xì)胞的細(xì)胞毒性;流式細(xì)胞儀及激光共聚焦顯微鏡考察MCF-7細(xì)胞的細(xì)胞攝取效率;流式細(xì)胞儀考察其在MCF-7細(xì)胞中的凋亡機(jī)制、周期機(jī)制

4、以及活性氧機(jī)制;通過細(xì)胞對阿霉素的攝取和消除考察細(xì)胞動力學(xué)。
　　研究結(jié)果:
　　成功構(gòu)建出DOX/DNA-RLT、DOX/DNA-CTAB、DOX/DNA-PEI藥物納米載體。繼而考察藥物納米載體在體外表征和作用于腫瘤細(xì)胞方面的優(yōu)劣，選定DOX/DNA-RLT為最適合的納米載體。其形態(tài)學(xué)穩(wěn)定，粒徑421nm，Zeta電位8.15mV，包載率79.56±0.09％，體外釋藥曲線最為緩慢，對腫瘤細(xì)胞的增值具有更高的抑制率。在細(xì)

5、胞動力學(xué)中DOX/DNA-RLT在胞內(nèi)能夠更快的攝入和更慢的消除。1h時在MCF-7細(xì)胞中的攝取率DOX為26.5±1.14％;DOX/DNA為27.1±0.38％;DOX/DNA-RLT為73.7±0.88％。DOX在48h時，凋亡率為3.50±1.61％，壞死率為9.76±0.12％;DOX/DNA凋亡率為19.99±0.11％，壞死率為13.43±0.23％;DOX/DNA-RLT凋亡率為26.42±2.97％，壞死率為15.3±

6、3.11％。DOX的G2/M期為66.08±1.21％，DOX/DNA的G2/M期為67.13±3.02％，DOX/DNA-RLT的G2/M期為75.13±2.18％。DOX在6h的時候產(chǎn)生活性氧的比值是1.33±0.15，DOX/DNA為1.90±0.10，DOX/DNA-RLT為2.5±0.10;DOX在24h的時候產(chǎn)生活性氧的比值是1.15±0.05，DOX/DNA為2.83±0.15，DOX/DNA-RLT為3.8±0.10。以

7、上數(shù)據(jù)顯示DOX/DNA-RLT具有較強(qiáng)抗腫瘤作用，與DOX和DOX/DNA相比有顯著性差異(P＜0.05)，RLT修飾的載體與PEI和CTAB相比毒性更低，更適宜作為藥物載體修飾材料。
　　研究結(jié)論:
　　本研究構(gòu)建的DOX/DNA-RLT是基于DNA生物材料的納米藥物載體，能夠?qū)⑺幬锓庋b在納米載體中，且性質(zhì)穩(wěn)定，顯著的提高包載藥物的效率和釋藥時間，不僅延長在腫瘤細(xì)胞內(nèi)作用時間，還能有效的防止了藥物在傳遞過程的泄漏。通過對