miR-106b靶向調(diào)控BMP2參與間充質(zhì)干細胞成骨分化與體內(nèi)骨形成.pdf

1、目的：
　　MicroRNA作為一類具有調(diào)節(jié)作用的小RNA分子，參與眾多生理過程。BMP2蛋白在間充質(zhì)干細胞（MSCs）成骨分化過程中發(fā)揮關(guān)鍵作用。本實驗探討了miR-106b調(diào)控MSCs成骨分化及在小鼠糖皮質(zhì)激素誘導的骨質(zhì)疏松癥（GIOP）骨形成中的作用機制。
　　方法：
　　實時定量PCR（microRNA特異性探針法或EVA Green法）確定miR-106b在成骨分化過程中的變化趨勢及與成骨相關(guān)基因（RUNX2

2、、ALP、OSTERIX、COL1A1）的相關(guān)性；生物信息學預測miR-106b與BMP2的靶向性，利用miR-106b mimic、miR-106b inhibitor在MSCs過表達或缺失表達 miR-106b進而確定miR-106b的功能；熒光素酶報告基因?qū)嶒灒↙uciferase assay）與Western Blot檢測microRNA與骨形成蛋白2（BMP2）之間的靶點關(guān)系；使用慢病毒-miR-106b inhibitor干

3、預小鼠糖皮質(zhì)激素誘導的骨質(zhì)疏松癥（GIOP）；采用組織化學和micro-CT分析miR-106b inhibitor對GIOP的影響；在mRNA和蛋白質(zhì)水平檢測骨形成和骨吸收相關(guān)的指標及BMP2/SMAD信號通路涉及的分子；
　　結(jié)果：
　　實時定量PCR結(jié)果表明，miR-106b在成骨分化過程中表達水平降低；過表達miR-106b抑制MSCs成骨分化；在Luciferase assay中，結(jié)果顯示mimic共轉(zhuǎn)染組熒光值低

4、于對照組，靶點突變后該效應逆轉(zhuǎn)；qRT-PCR和Western Blot實驗結(jié)果表明轉(zhuǎn)染miR-106b過表達降低BMP2 mRNA和蛋白質(zhì)水平，inhibitor則產(chǎn)生相反的效果；干預GIOP的實驗中，miR-106b inhibitor能夠增加骨質(zhì)量、提高成骨細胞數(shù)目、骨形成率，提高血清中PINP的水平，同時增加BMP2、SMAD1和SMAD5 mRNA的表達水平。此外，miR-106b inhibitor還降低了血清中CTx-1的