miR-106b靶向調(diào)控BMP2參與間充質(zhì)干細(xì)胞成骨分化與體內(nèi)骨形成.pdf

1、目的：
　　MicroRNA作為一類具有調(diào)節(jié)作用的小RNA分子，參與眾多生理過(guò)程。BMP2蛋白在間充質(zhì)干細(xì)胞（MSCs）成骨分化過(guò)程中發(fā)揮關(guān)鍵作用。本實(shí)驗(yàn)探討了miR-106b調(diào)控MSCs成骨分化及在小鼠糖皮質(zhì)激素誘導(dǎo)的骨質(zhì)疏松癥（GIOP）骨形成中的作用機(jī)制。
　　方法：
　　實(shí)時(shí)定量PCR（microRNA特異性探針?lè)ɑ駿VA Green法）確定miR-106b在成骨分化過(guò)程中的變化趨勢(shì)及與成骨相關(guān)基因（RUNX2

2、、ALP、OSTERIX、COL1A1）的相關(guān)性；生物信息學(xué)預(yù)測(cè)miR-106b與BMP2的靶向性，利用miR-106b mimic、miR-106b inhibitor在MSCs過(guò)表達(dá)或缺失表達(dá) miR-106b進(jìn)而確定miR-106b的功能；熒光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)（Luciferase assay）與Western Blot檢測(cè)microRNA與骨形成蛋白2（BMP2）之間的靶點(diǎn)關(guān)系；使用慢病毒-miR-106b inhibitor干

3、預(yù)小鼠糖皮質(zhì)激素誘導(dǎo)的骨質(zhì)疏松癥（GIOP）；采用組織化學(xué)和micro-CT分析miR-106b inhibitor對(duì)GIOP的影響；在mRNA和蛋白質(zhì)水平檢測(cè)骨形成和骨吸收相關(guān)的指標(biāo)及BMP2/SMAD信號(hào)通路涉及的分子；
　　結(jié)果：
　　實(shí)時(shí)定量PCR結(jié)果表明，miR-106b在成骨分化過(guò)程中表達(dá)水平降低；過(guò)表達(dá)miR-106b抑制MSCs成骨分化；在Luciferase assay中，結(jié)果顯示mimic共轉(zhuǎn)染組熒光值低

4、于對(duì)照組，靶點(diǎn)突變后該效應(yīng)逆轉(zhuǎn)；qRT-PCR和Western Blot實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明轉(zhuǎn)染miR-106b過(guò)表達(dá)降低BMP2 mRNA和蛋白質(zhì)水平，inhibitor則產(chǎn)生相反的效果；干預(yù)GIOP的實(shí)驗(yàn)中，miR-106b inhibitor能夠增加骨質(zhì)量、提高成骨細(xì)胞數(shù)目、骨形成率，提高血清中PINP的水平，同時(shí)增加BMP2、SMAD1和SMAD5 mRNA的表達(dá)水平。此外，miR-106b inhibitor還降低了血清中CTx-1的