BMP2對(duì)干細(xì)胞成軟骨、成骨分化影響的研究.pdf

1、目的：探討骨形態(tài)發(fā)生蛋白2（bone morphogenetic protein2，BMP2）在相同條件中對(duì)干細(xì)胞成軟骨、成骨分化的影響。
　　方法：構(gòu)建及擴(kuò)增表達(dá)BMP2的腺病毒載體Ad-BMP2,并感染目的細(xì)胞C3H10T1/2，Western blot驗(yàn)證其目的蛋白的表達(dá)；BMP2誘導(dǎo)干細(xì)胞分化后通過Alcian blue、ALP（alkaline phosphatase，ALP）及Alizarin red S染色檢測(cè)軟骨細(xì)

2、胞外基質(zhì)分泌、堿性磷酸酶的表達(dá)以及鈣鹽的沉積情況，Western blot和（或）免疫組織化學(xué)檢測(cè)成軟骨、成骨分化關(guān)鍵轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子Sox9、Runx2的表達(dá)，同時(shí)檢測(cè)成軟骨、成骨分化標(biāo)志物Col2A1、Co1A1、Col10A1、OCN的表達(dá)；通過胎鼠肢芽培養(yǎng)，觀察 BMP2對(duì)胎鼠骨軟骨發(fā)育的影響；通過干細(xì)胞裸鼠皮下注射實(shí)驗(yàn)，體內(nèi)進(jìn)一步探討B(tài)MP2對(duì)干細(xì)胞成軟骨、成骨分化的影響。
　　結(jié)果：Ad-BMP2感染干細(xì)胞后2、4天，能夠

3、觀察到BMP2蛋白高表達(dá)；在同一條件下，BMP2誘導(dǎo)干細(xì)播啊分化后第3、5天，能同時(shí)促進(jìn)軟骨、成骨分化關(guān)鍵轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子Sox9、Runx2蛋白水平的表達(dá)；誘導(dǎo)分化后第5、7、9天，成軟骨分化標(biāo)志物Col2A1表達(dá)增加，且軟骨細(xì)胞外基質(zhì)分泌增加，同時(shí)軟骨細(xì)胞肥大相關(guān)標(biāo)志物 Col10A1表達(dá)也明顯增加；成骨分化標(biāo)志物Co1A1、OCN的表達(dá)增加，ALP表達(dá)增加，并且可見明顯的鈣鹽沉積；胎鼠肢芽培養(yǎng)見 BMP2明顯促進(jìn)了軟骨細(xì)胞肥大，促進(jìn)了