BMP2對干細胞成軟骨、成骨分化影響的研究.pdf

1、目的：探討骨形態(tài)發(fā)生蛋白2（bone morphogenetic protein2，BMP2）在相同條件中對干細胞成軟骨、成骨分化的影響。
　　方法：構(gòu)建及擴增表達BMP2的腺病毒載體Ad-BMP2,并感染目的細胞C3H10T1/2，Western blot驗證其目的蛋白的表達；BMP2誘導干細胞分化后通過Alcian blue、ALP（alkaline phosphatase，ALP）及Alizarin red S染色檢測軟骨細

2、胞外基質(zhì)分泌、堿性磷酸酶的表達以及鈣鹽的沉積情況，Western blot和（或）免疫組織化學檢測成軟骨、成骨分化關(guān)鍵轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子Sox9、Runx2的表達，同時檢測成軟骨、成骨分化標志物Col2A1、Co1A1、Col10A1、OCN的表達；通過胎鼠肢芽培養(yǎng)，觀察 BMP2對胎鼠骨軟骨發(fā)育的影響；通過干細胞裸鼠皮下注射實驗，體內(nèi)進一步探討B(tài)MP2對干細胞成軟骨、成骨分化的影響。
　　結(jié)果：Ad-BMP2感染干細胞后2、4天，能夠

3、觀察到BMP2蛋白高表達；在同一條件下，BMP2誘導干細播啊分化后第3、5天，能同時促進軟骨、成骨分化關(guān)鍵轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子Sox9、Runx2蛋白水平的表達；誘導分化后第5、7、9天，成軟骨分化標志物Col2A1表達增加，且軟骨細胞外基質(zhì)分泌增加，同時軟骨細胞肥大相關(guān)標志物 Col10A1表達也明顯增加；成骨分化標志物Co1A1、OCN的表達增加，ALP表達增加，并且可見明顯的鈣鹽沉積；胎鼠肢芽培養(yǎng)見 BMP2明顯促進了軟骨細胞肥大，促進了