P2Y13在少突膠質(zhì)細(xì)胞中的表達(dá)及其在脫髓鞘疾病中的作用研究.pdf

1、少突膠質(zhì)細(xì)胞(oligodendrocyte，OL)是中樞神經(jīng)系統(tǒng)形成髓鞘的細(xì)胞，髓鞘是神經(jīng)沖動(dòng)沿軸突跳躍式快速傳導(dǎo)的重要結(jié)構(gòu)基礎(chǔ)。少突膠質(zhì)細(xì)胞為軸突提供營(yíng)養(yǎng)，在維持軸突的完整性、能量代謝過(guò)程中發(fā)揮重要作用，還可以通過(guò)分泌神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子調(diào)節(jié)神經(jīng)元的存活。
　　中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病如多發(fā)性硬化癥、腦白質(zhì)營(yíng)養(yǎng)不良癥、腦脊髓損傷、老年性癡呆、精神分裂癥、肌萎縮側(cè)面束硬化癥等的發(fā)生與少突膠質(zhì)細(xì)胞發(fā)育異常和/或脫髓鞘事件密切相關(guān)。在如神經(jīng)系統(tǒng)損傷

2、等病理?xiàng)l件下，由于具有對(duì)不利刺激極度敏感的特性，少突膠質(zhì)細(xì)胞極容易死亡，從而導(dǎo)致軸突發(fā)生脫髓鞘。
　　在中樞神經(jīng)系統(tǒng)中，通過(guò)激活嘌呤能信號(hào)影響髓鞘化進(jìn)程。胞外信號(hào)和胞內(nèi)因子通過(guò)調(diào)節(jié)少突膠質(zhì)細(xì)胞成熟過(guò)程和軸突活動(dòng)，發(fā)揮調(diào)節(jié)髓鞘化的作用。有文獻(xiàn)指出，在純化的原代和小腦組織切片中，ATP和ADP都能抑制少突膠質(zhì)細(xì)胞前體細(xì)胞(Oligodendrocyte precursor cells，OPCs)增殖。除了UTP，ATP和ADP在刺激O

3、PC遷移和促進(jìn)少突膠質(zhì)細(xì)胞分化方面比血小板源性生長(zhǎng)因子(PDGF)更有效。最近有研究發(fā)現(xiàn)嘌呤能信號(hào)在少突膠質(zhì)細(xì)胞發(fā)育階段后期能刺激髓鞘化。已有研究表明，有多種P2Y受體參與調(diào)節(jié)少突膠質(zhì)細(xì)胞的發(fā)育進(jìn)程。
　　基于以上事實(shí)，我們研究了嘌呤能受體P2Y13在野生型小鼠髓鞘生成過(guò)程中的作用。首先，我們利用免疫熒光和原位雜交技術(shù)檢測(cè)P2Y13受體在野生型新生小鼠不同發(fā)育階段(P1，P10，P20，P40)的表達(dá)情況。結(jié)果顯示，不同發(fā)育階段(

4、P1，P10，P20，P40)都能檢測(cè)到P2Y13受體陽(yáng)性細(xì)胞的表達(dá)，表達(dá)量具有“先升高后降低”的趨勢(shì)。其次，我們利用免疫熒光技術(shù)檢測(cè)了P2Y13受體表達(dá)的細(xì)胞類型，結(jié)果表明P2Y13受體特異性地表達(dá)在Olig2+少突膠質(zhì)細(xì)胞上。利用體外培養(yǎng)OPCs和免疫熒光技術(shù)，我們發(fā)現(xiàn)P2Y13受體主要表達(dá)在少突膠質(zhì)細(xì)胞成熟前至成熟早期階段。再次，利用體外純化培養(yǎng)的OPCs體系，我們發(fā)現(xiàn)給予P2Y13受體激動(dòng)劑能增加MBP的表達(dá)，而給予P2Y13受

5、體拮抗劑則可以抑制MBP的表達(dá)。在銅腙誘導(dǎo)的脫髓鞘疾病模型中，我們觀察到胼胝體部位的MBP表達(dá)量呈“先減少后增多”的趨勢(shì)，在髓鞘再生階段給予P2Y13受體激動(dòng)劑和拮抗劑，mRNA和蛋白表達(dá)量提示，SC251675能促進(jìn)銅腙脫髓鞘模型中的髓鞘再生，而MRS2211能抑制髓鞘再生。我們建立了P2Y13KO和WT銅腙脫髓鞘模型，通過(guò)免疫熒光技術(shù)檢測(cè)胼胝體部位NG2和MBP陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)，我們發(fā)現(xiàn)P2Y13分子是通過(guò)調(diào)節(jié)OPCs向少突膠質(zhì)細(xì)胞分化來(lái)

6、調(diào)節(jié)銅腙模型中髓鞘再生過(guò)程。我們對(duì)P2Y13KO小鼠與WT小鼠進(jìn)行了行為學(xué)實(shí)驗(yàn)（高架十字迷宮，強(qiáng)迫游泳，水迷宮）。結(jié)果表明，在高架十字迷宮實(shí)驗(yàn)中，與WT小鼠相比，P2Y13KO小鼠在進(jìn)入開(kāi)臂次數(shù)、開(kāi)臂停留時(shí)間百分比和總進(jìn)壁次數(shù)均明顯降低，提示P2Y13KO小鼠具有焦慮增加的傾向;強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示，P2Y13KO小鼠不具有抑郁傾向;水迷宮實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示，P2Y13KO小鼠學(xué)習(xí)記憶能力不受影響。
　　本研究具有以下幾個(gè)亮點(diǎn):(1)研