BAMBI對ox-LDL誘導的血管內皮細胞損傷的影響及機制研究.pdf

1、目的:
　　探討激活素膜結合抑制劑(bmp and activin membrane-boundinhibitor，BAMBI)對氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)誘導的人靜脈內皮細胞(humanumbilical vascular endothelial cell，HUVECs)損傷的影響及其分子調控機制。
　　方法:
　　1.BAMBI在ox-LDL誘導的內皮細胞損傷中的作用
　　HUVECs分為以下六組:對

2、照(control)組;ox-LDL組;BAMBI+ox-LDL組;pcDNA3.1+ox-LDL組;si-BAMBI+ox-LDL組;si-control+ ox-LDL組。MTT方法檢測細胞增殖。流式細胞儀檢測凋亡。RT-PCR檢測mRNA水平。Western blot檢測蛋白含量。流式細胞儀檢測ROS水平。試劑盒檢測亞硝酸鹽和cGMP水平。
　　2.BAMBI通過調控TGF-β/Smad通路發(fā)揮生物學作用
　　HUVE

3、Cs分為以下六組:對照（control）組;ox-LDL組;BAMBI+ox-LDL組;TGF-β+BAMBI+ox-LDL組;si-BAMBI+ox-LDL組;TGF-β+si-BAMBI+ox-LDL組。檢測方法同方法1。
　　3.Ox-LDL/TLR4/NF-κB信號通路調控BAMBI/TGF-β通路
　　HUVECs分為以下八組:對照（control）組;ox-LDL組;BAMBI+ox-LDL組;CLI-095+B

4、AMBI+ox-LDL組;PDTC+BAMBI+ox-LDL組;si-BAMBI+ox-LDL組;CLI-095+si-BAMBI+ox-LDL組;PDTC+si-BAMBI+ox-LDL組。檢測方法同方法1。
　　4.miR-373調控ox-LDL誘導的HUVECs中BAMBI表達
　　HUVECs分為以下六組:對照(control)組;ox-LDL組;mimic+ox-LDL組;mimic+BAMBI+ox-LDL組;i

5、nhibitor+ox-LDL組;inhibitor+si-BAMBI+ox-LDL組。雙熒光素酶報告基因檢測試劑盒檢測miR-373與BAMBI的靶向關系，其他檢測方法同方法1。
　　結果:
　　1.BAMBI在ox-LDL誘導的內皮細胞損傷中的作用
　　研究結果顯示，BAMBI在ox-LDL誘導的HUVECs中表達下調。在ox-LDL誘導的HUVECs中，過表達BAMBI能夠促進細胞增殖;降低細胞凋亡;下調炎性因子

6、IL-1β、IL-6、TNF-α和黏附因子E-selectin、VCAM1、ICAM1的表達;抑制氧化應激反應，降低ROS和MDA水平，同時提高SOD的表達;提高NO和eNOS的產生。當在ox-LDL誘導的HUVECs中抑制BAMBI表達時，作用與過表達BAMBI相反，抑制細胞增殖;促進細胞凋亡;上調炎性因子IL-1β、IL-6、TNF-α和黏附因子E-selectin、VCAM1、ICAM1的表達;促進氧化應激反應并降低NO和eNOS

7、的產生。
　　2.BAMBI通過調控TGF-β/Smad通路發(fā)揮生物學作用
　　研究結果顯示，在ox-LDL誘導的HUVECs中，TGF-β、p-Smad2和p-Smad3的表達水平上調。過表達TGF-β能夠部分逆轉BAMBI過表達在ox-LDL誘導的HUVECs中的抗內皮細胞損傷作用，從而抑制細胞增殖;增加細胞凋亡;上調炎性因子和黏附因子的表達;促進氧化應激反應并降低NO和eNOS的產生。相反地，過表達TGF-β能夠加劇B

8、AMBI抑制在ox-LDL誘導的HUVECs中的促內皮細胞損傷作用。
　　3.Ox-LDL/TLR4/NF-κB信號通路調控BAMBI/TGF-β通路
　　研究結果顯示，在ox-LDL誘導的HUVECs中，TLR4、p-IκB-α和p-p65的蛋白表達水平上調。TLR4抑制劑CLI-095或NF-κB抑制劑PDTC預處理能夠上調BAMBI的表達，并且能夠加強BAMBI過表達在ox-LDL誘導的HUVECs中的抗內皮細胞損傷作

9、用，部分逆轉BAMBI抑制在ox-LDL誘導的HUVECs中的促內皮細胞損傷作用。
　　4.miR-373調控ox-LDL誘導的HUVECs中BAMBI表達
　　研究結果顯示，在ox-LDL誘導的HUVECs中，miR-373表達上調，能夠靶向BAMBI mRNA3'-UTR來調控其表達。miR-373通過調控BAMBI介導的TGF-β/Smad信號通路發(fā)揮生物學作用。抑制miR-373表達，能夠抵抗ox-LDL誘導的內皮細

10、胞損傷，包括促進細胞增殖;降低細胞凋亡;下調炎性因子和黏附因子的表達;抑制氧化應激反應并提高NO和eNOS的產生。
　　結論:
　　綜上所述，本研究結果表明在ox-LDL誘導的HUVECs中，BAMBI表達下調，其下游TGF-β/Smad通路激活。過表達BAMBI能夠抑制TGF-β/Smad通路，促進細胞增殖;降低細胞凋亡;下調炎性因子和黏附因子的表達;抑制氧化應激反應并提高NO和eNOS的產生，從而抵抗內皮細胞損傷。抑制T