BAMBI對ox-LDL誘導(dǎo)的血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷的影響及機(jī)制研究.pdf

1、目的:
　　探討激活素膜結(jié)合抑制劑(bmp and activin membrane-boundinhibitor，BAMBI)對氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)誘導(dǎo)的人靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(humanumbilical vascular endothelial cell，HUVECs)損傷的影響及其分子調(diào)控機(jī)制。
　　方法:
　　1.BAMBI在ox-LDL誘導(dǎo)的內(nèi)皮細(xì)胞損傷中的作用
　　HUVECs分為以下六組:對

2、照(control)組;ox-LDL組;BAMBI+ox-LDL組;pcDNA3.1+ox-LDL組;si-BAMBI+ox-LDL組;si-control+ ox-LDL組。MTT方法檢測細(xì)胞增殖。流式細(xì)胞儀檢測凋亡。RT-PCR檢測mRNA水平。Western blot檢測蛋白含量。流式細(xì)胞儀檢測ROS水平。試劑盒檢測亞硝酸鹽和cGMP水平。
　　2.BAMBI通過調(diào)控TGF-β/Smad通路發(fā)揮生物學(xué)作用
　　HUVE

3、Cs分為以下六組:對照（control）組;ox-LDL組;BAMBI+ox-LDL組;TGF-β+BAMBI+ox-LDL組;si-BAMBI+ox-LDL組;TGF-β+si-BAMBI+ox-LDL組。檢測方法同方法1。
　　3.Ox-LDL/TLR4/NF-κB信號通路調(diào)控BAMBI/TGF-β通路
　　HUVECs分為以下八組:對照（control）組;ox-LDL組;BAMBI+ox-LDL組;CLI-095+B

4、AMBI+ox-LDL組;PDTC+BAMBI+ox-LDL組;si-BAMBI+ox-LDL組;CLI-095+si-BAMBI+ox-LDL組;PDTC+si-BAMBI+ox-LDL組。檢測方法同方法1。
　　4.miR-373調(diào)控ox-LDL誘導(dǎo)的HUVECs中BAMBI表達(dá)
　　HUVECs分為以下六組:對照(control)組;ox-LDL組;mimic+ox-LDL組;mimic+BAMBI+ox-LDL組;i

5、nhibitor+ox-LDL組;inhibitor+si-BAMBI+ox-LDL組。雙熒光素酶報告基因檢測試劑盒檢測miR-373與BAMBI的靶向關(guān)系，其他檢測方法同方法1。
　　結(jié)果:
　　1.BAMBI在ox-LDL誘導(dǎo)的內(nèi)皮細(xì)胞損傷中的作用
　　研究結(jié)果顯示，BAMBI在ox-LDL誘導(dǎo)的HUVECs中表達(dá)下調(diào)。在ox-LDL誘導(dǎo)的HUVECs中，過表達(dá)BAMBI能夠促進(jìn)細(xì)胞增殖;降低細(xì)胞凋亡;下調(diào)炎性因子

6、IL-1β、IL-6、TNF-α和黏附因子E-selectin、VCAM1、ICAM1的表達(dá);抑制氧化應(yīng)激反應(yīng)，降低ROS和MDA水平，同時提高SOD的表達(dá);提高NO和eNOS的產(chǎn)生。當(dāng)在ox-LDL誘導(dǎo)的HUVECs中抑制BAMBI表達(dá)時，作用與過表達(dá)BAMBI相反，抑制細(xì)胞增殖;促進(jìn)細(xì)胞凋亡;上調(diào)炎性因子IL-1β、IL-6、TNF-α和黏附因子E-selectin、VCAM1、ICAM1的表達(dá);促進(jìn)氧化應(yīng)激反應(yīng)并降低NO和eNOS

7、的產(chǎn)生。
　　2.BAMBI通過調(diào)控TGF-β/Smad通路發(fā)揮生物學(xué)作用
　　研究結(jié)果顯示，在ox-LDL誘導(dǎo)的HUVECs中，TGF-β、p-Smad2和p-Smad3的表達(dá)水平上調(diào)。過表達(dá)TGF-β能夠部分逆轉(zhuǎn)BAMBI過表達(dá)在ox-LDL誘導(dǎo)的HUVECs中的抗內(nèi)皮細(xì)胞損傷作用，從而抑制細(xì)胞增殖;增加細(xì)胞凋亡;上調(diào)炎性因子和黏附因子的表達(dá);促進(jìn)氧化應(yīng)激反應(yīng)并降低NO和eNOS的產(chǎn)生。相反地，過表達(dá)TGF-β能夠加劇B

8、AMBI抑制在ox-LDL誘導(dǎo)的HUVECs中的促內(nèi)皮細(xì)胞損傷作用。
　　3.Ox-LDL/TLR4/NF-κB信號通路調(diào)控BAMBI/TGF-β通路
　　研究結(jié)果顯示，在ox-LDL誘導(dǎo)的HUVECs中，TLR4、p-IκB-α和p-p65的蛋白表達(dá)水平上調(diào)。TLR4抑制劑CLI-095或NF-κB抑制劑PDTC預(yù)處理能夠上調(diào)BAMBI的表達(dá)，并且能夠加強(qiáng)BAMBI過表達(dá)在ox-LDL誘導(dǎo)的HUVECs中的抗內(nèi)皮細(xì)胞損傷作

9、用，部分逆轉(zhuǎn)BAMBI抑制在ox-LDL誘導(dǎo)的HUVECs中的促內(nèi)皮細(xì)胞損傷作用。
　　4.miR-373調(diào)控ox-LDL誘導(dǎo)的HUVECs中BAMBI表達(dá)
　　研究結(jié)果顯示，在ox-LDL誘導(dǎo)的HUVECs中，miR-373表達(dá)上調(diào)，能夠靶向BAMBI mRNA3'-UTR來調(diào)控其表達(dá)。miR-373通過調(diào)控BAMBI介導(dǎo)的TGF-β/Smad信號通路發(fā)揮生物學(xué)作用。抑制miR-373表達(dá)，能夠抵抗ox-LDL誘導(dǎo)的內(nèi)皮細(xì)

10、胞損傷，包括促進(jìn)細(xì)胞增殖;降低細(xì)胞凋亡;下調(diào)炎性因子和黏附因子的表達(dá);抑制氧化應(yīng)激反應(yīng)并提高NO和eNOS的產(chǎn)生。
　　結(jié)論:
　　綜上所述，本研究結(jié)果表明在ox-LDL誘導(dǎo)的HUVECs中，BAMBI表達(dá)下調(diào)，其下游TGF-β/Smad通路激活。過表達(dá)BAMBI能夠抑制TGF-β/Smad通路，促進(jìn)細(xì)胞增殖;降低細(xì)胞凋亡;下調(diào)炎性因子和黏附因子的表達(dá);抑制氧化應(yīng)激反應(yīng)并提高NO和eNOS的產(chǎn)生，從而抵抗內(nèi)皮細(xì)胞損傷。抑制T